Lipoglavšek, L. in Avguštin, G. Uporaba sond in pretočne citometrije za analizo v bioloških čistilnih sistemih. Zb. Biotehniške fak. Univ. v Ljubljani
|
|
- Ervin Pintarič
- pred 4 leti
- Pregledov:
Transkripcija
1 113 Izvirni znanstveni prispevek Original scientific paper UPORABA OLIGONUKLEOTIDNIH SOND IN PRETOČNE CITOMETRIJE ZA ANALIZO BAKTERIJSKE ZDRUŽBE V BIOLOŠKIH ČISTILNIH SISTEMIH Luka LIPOGLAVŠEK a) in Gorazd AVGUŠTIN b) a) Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Odd. za zootehniko, Groblje 3, SI-1230 Domžale, Slovenija. b) Isti naslov, izr.prof., dr., mag. Delo je prispelo , sprejeto Received October 07, 1999, accepted April 10, IZVLEČEK Proučevanje združbe mikroorganizmov v aktivnem blatu z obstoječimi mikrobiološkimi metodami predstavlja nerešljiv problem, kadar želimo ugotavljati ne le število vseh mikroorganizmov v vzorcu temveč tudi število bakterij specifičnih bakterijskih subpopulacij. Opisali smo metodo za hitro analiziranje aktivnega blata z uporabo dveh različno označenih oligonukleotidnih sond in pripadajočih detektorjev fluorescence pretočnega citometra. S pomočjo sond EUB338-Cy3 in fd1-fitc, specifičnih za vse bakterije, smo postavili model in ga preizkusili s 16S rrnk sondo NSO190-FITC, specifično za kemolitotrofne oksidatorje amonija iz β- podskupine proteobakterij. Ugotovili smo, da je bilo v vzorcu 16,3% bakterij, ki jih prepozna omenjena sonda. Kot možno izboljšavo smo preizkusili učinek tripansko modrega na avtofluorescenco in fluorescenco s sondami hibridiziranih celic. Tripansko modro zniža raven zelene avtofluorescence in nespecifične fluorescence, ne vpliva pa na fluorescenco specifično hibridiziranih celic. Ključne besede: čistilni sistemi / biološki čistilni sistemi / aktivno blato / mikrobiologija / bakterije / analitske metode / rrnk sonde / pretočna citometrija / oksidatorji amonija THE USE OF FLOW CYTOMETRY AND OLIGONUCLEOTIDE PROBES FOR BACTERIAL COMMUNITY STRUCTURE ANALYSIS IN BIOLOGICAL WASTEWATER TREATMENT SYSTEMS ABSTRACT Investigation of microbial community structure in activated sludge is often complicated. When not only total bacterial counts, but also counts of bacterial subpopulations are to be determined, existing methods are not successful. In the present article, a method for analysis of activated sludge with two, differently labelled oligonucleotide probes and affiliated flow cytometric detectors is described. Oligonucleotide probes EUB338-Cy3 and fd1-fitc, specific for all bacteria were used to set the experimental model for flow cytometry analysis. This model was than used to analyze activated sludge sample with 16S rrna targeted probe NSO190-FITC, specific for amonia oxidizing bacteria from β- subclass of Proteobacteria. In the examined sample 16.3% of bacteria hibridized with this probe. Finally, effects of tripan blue on cell autofluorescence and probe-specific fluorecence were investigated. Tripan blue did not alter the FITC-probe-specific fluorescence, while the level of autofluorescence and nonspecific fluorescence dropped. Key words: wastewater treatment systems / biological wastewater treatment systems / activated sludge / microbiology / bacteria / analytical methods / rrna probes / flow cytomtery / amonia-oxidizing bacteria
2 UVOD S čiščenjem komunalnih in industrijskih odpadnih vod pred izpustom v vodotoke precej zmanjšamo obremenjevanje okolja. Za čiščenje komunalnih in nekaterih industrijskih odpadnih vod predstavlja najpomembnejši del procesa t.i. biološko čiščenje (Brock in sod., 1994). To temelji na sposobnosti organizmov, večinoma mikroorganizmov, med katerimi prevladujejo bakterije, da iz vode privzemajo organske in anorganske snovi, ter jih uporabljajo kot hranila za svojo rast. Glavna namena biološkega čiščenja sta zmanjšanje biološke potrebe po kisiku v vodi in odstranitev prekomerne količine hranil, predvsem dušika in fosforja. Vemo, da so najpomembnejši mediator transformacij v aktivni biomasi čistilnih sistemov bakterije in da je bakterijska združba aktivnega blata zelo pestra. Vsaka fiziološka skupina bakterij prispeva svoj delež k transformacijam, ki privedejo do odstranitve hranil iz sistema. Različne odpadne vode se lahko zelo razlikujejo po fizikalno kemičnih lastnostih, prav tako pa se lahko tudi zelo spreminjajo značilnosti vode na posamezni napravi. Nihanja v sestavi vode dostikrat vplivajo na učinkovitost čistilne naprave. Laboratorijski poskusi kažejo, da je sestava združbe odvisna od količine določenih hranil (Holben in sod., 1998; Prinčič in sod., 1998). Medtem ko lahko glavne presnovne spremembe merimo kemično, ni dosti znanega o odzivih posameznih skupin bakterij na spremembe v njihovem okolju. Preprosto določanje števila različnih bakterij, bi v kombinaciji z merjenjem aktivnosti omogočalo lažje spremljanje samega procesa. Klasično določanje števila bakterij z gojitvenimi tehnikami je večinoma neprimerno. Raziskovalci ocenjujejo, da smo sposobni in vitro gojiti le od 1 do 15% bakterij iz vzorca aktivnega blata (Wagner in sod., 1993). Poleg tega so spoznali, da gojitvene metode niso primerne za opis vrstne pestrosti (Juretschko in sod., 1998), hkrati pa so dostikrat izredno zamudne. Drugo možnost za kvantifikacijo predstavljajo molekulsko biološke metode. Ena od njih je hibridizacija in situ (Amann in sod., 1990a). V osemdesetih letih so s preučevanjem ribosomskih genov začeli ugotavljati filogenetski položaj različnih mikroorganizmov (Woese, 1987). Danes je poznanih največ bakterijskih sekvenc 16S rrnk. Spoznali so tudi, da so nekateri predeli rrnk specifični za različne bakterijske skupine. Na podlagi teh podatkov lahko pripravimo oligonukleotide, s katerimi lahko označimo naprimer vse bakterije, β- proteobakterije ali samo eno bakterijsko vrsto. Ponavadi sonde označimo s fluorescentnim označevalcem, mikrobne celice, ki jih označene sonde prepoznajo, pa odkrivamo s fluorescentnim mikroskopom. Hibridizirane vzorce lahko analiziramo tudi s pretočnim citometrom (Davey in Kell, 1996). Pretočni citometer je aparat, ki s hitrostjo do nekaj tisoč celic na sekundo zazna nekatere lastnosti posamezne celice. Najpomembnejši del je pretočna celica, kjer se vzorec razporedi v tanek tok, v katerem so celice razporejene ena za drugo. Tok celic gre skozi tanek snop svetlobe, od celice odbito svetlobo pa zazna več detektorjev, ki jo pretvorijo v električni signal. Jakosti signala se nato pripiše vrednost. S tem je dogodek uvrščen na primeren kanal in osnovni rezultat analize je histogram, ki nam prikaže število celic (dogodkov) na vsakem od kanalov (grafikon 7). Dobimo lahko dva tipa podatkov o celici. Prvi tip predstavljajo odboji svetlobe pod različnimi koti, drugega pa fluorescence različnih valovnih dolžin. Lastnost celic, da lomijo svetlobo, je že dolgo poznana. Merjenje optične gostote in merjenje odbite svetlobe pod pravim kotom, t.i. nefelometrija, se že dolgo uporabljata za približno oceno celične mase v raztopinah. Dejansko se svetloba na delcu razprši v vse smeri. Današnji pretočni citometri merijo dve značilnosti odboja svetlobe. Svetlobo, razpršeno pod majhnimi koti (2-15º), imenujemo prednji odboj (angl.: forward-scatter) in svetlobo odbito pod večjimi koti (15-90º), čemur pravimo stranski odboj (angl.: side-scatter). Prednji odboj se uporablja kot relativna mera za velikost celic (Sharpless in sod., 1977). Na stranski odboj najbolj vpliva refrakcijski indeks delca. Tako je stranski odboj merilo za granuliranost celice. 114
3 Z uporabo fluorescence se pokažejo vse zmožnosti pretočne citometrije. Prvo možnost uporabe predstavlja avtofluorescenca organizmov. To pogosto uporabljajo za zaznavo barvil v morskih algah. Pri večini drugih aplikacij pa predstavlja avtofuorescenca resen problem. Druga, precej širša je možnost uporabe fluorokromov. Različni fluorokromi fluorescirajo v različnih območjih svetlobnega spektra, zmeraj pa je valovna dolžina emitirane svetlobe daljša od vzbujevalne svetlobe. Zaradi različnih zamikov med vzbujevalno in emitirano svetlobo lahko tudi pri istem viru svetlobe opazujemo različne fluorescence. Tako pridemo do velikega števila parametrov, ki jih lahko spremljamo (Davey in Kell, 1996). Dodatna možnost pretočne citometrije je fizično ločevanje celic - razvrščanje (cell sorting). Raztopino, ki preide pretočno celico, aparat razbije na drobne kapljice. Te vsebujejo največ eno celico in na osnovi podatkov, ki jih je analiziral pretočni citometer, se na želeni kapljici ustvari naboj. Na podlagi tega lahko določene celice - kapljice ločimo od ostalih. Prvi korak pri pridobivanju podatkov je nastavitev občutljivosti detektorjev v pravo območje. Zlasti pri delu z bakterijami zajamemo običajno v to območje tudi veliko šuma. Večino šuma se lahko uspešno znebimo s postavitvijo praga (angl: threshold). Če delec pri izbranem parametru preseže vrednost praga, se aktivirajo še drugi detektorji in zabeležijo merjene vrednosti. Če pa delec ne preseže vrednosti, ki je postavljena kot prag, se njegova prisotnost ne zazna. Število shranjenih podatkov lahko zmanjšamo tudi tako, da se omejimo le na populacijo, ki jo določimo na enem izmed grafikonov z izbiro tako imenovanih vrat (angl: gate). Poleg enoparametnih histogramov lahko rezultate predstavimo kot tridimenzionalne dvoparametne histograme, dvoparametne točkovne (angl: dot plot, grafikon 1) in orisne grafikone (angl: contour plot). Novejša programska oprema omogoča tudi tridimenzionalne točkovne prikaze. Tudi pri prikazu podatkov se lahko omejimo na eno izmed populacij z izbiro vrat. Kombinacijo pretočne citometrije in in situ hibridizacije so že uporabili za analizo mikroorganizmov aktivnega blata (Wallner in sod., 1995). S sondo, ki hibridizira z vsemi bakterijami, so uspeli označiti 70 do 80% celic, označenih z barvilom DAPI, ki se specifično veže na nukleinske kisline. Vzorce so analizirali z različnimi 16S rrnk sondami, specifičnimi za različno velike bakterijske skupine. Mikroskopska in citometrična štetja so se ujemala. Za analizo so potrebovali dva različna eksitacijska laserja, mi pa smo želeli postopek prilagoditi aparaturi z enim laserjem. MATERIAL IN METODE Priprava in fiksacija vzorca Vzorec aktivnega blata smo odvzeli sredi oksigene faze eksperimentalnega sekvenčnega reaktorja na Kemijskem inštitutu v Ljubljani. Ker je vzorec vseboval mikrobno združbo v kompaktnih skupkih, t.i. flokulah, smo morali vzorec najprej obdelati. Za citometrično analizo smo vzorec pripravili z večkratnim zaporednim stresanjem v 10 mm PBS (ph 7,4). Po vsakem stresanju smo s 5 minutnim posedanjem ločili večje flokule od manjših in prostih celic. Vse zgornje faze smo združili in vzorec fiksirali 90 minut v 4% formaldehidu (Amann in sod., 1990b). Vzorec smo shranili v etanolu v PBS (1:1) pri 20 C. Hibridizacija Hibridizacijo smo izvajali po postopku, rahlo drugačnem od metode, ki so jo opisali Manz in sod. (1992). Reakcijski volumen je bil 200 µl. Reakcijska mešanica je vsebovala 5 ng/µl posamezne sonde, 20 µl vzorca in ustrezno količino formamida ter hibridizacijskega pufra (0,1% SDS, 20 mm Tris-HCl, ph 7,4, 0,9 M NaCl). Hibridizacija je potekala 16 ur pri temperaturi 115
4 46 C. Uporabljene sonde so naštete v preglednici 1. Označene so bile s sulfoizocianinskim fluorokromom Cy3, z emisijskim maksimumom pri 565 nm in fluorescein izotiocianatom (FITC), z emisijskim maksimumom pri 520 nm. Hibridizacijo smo ustavili z dodatkom 1 ml ledeno hladnega PBS (ph 8,0). Pred analizo na pretočnem citometru smo vzorec centrifugirali in resuspendiral v 1 ml ledeno hladnega PBS (ph 8,0). Preglednica 1. Uporabljene oligonukleotidne sonde Table1. Oligonucleotide probes used Sonda Probe Specifičnost Specificity Sekvenca (5-3 ) Sequence(5-3 ) %FA* Vir Reference EUB338 fd1 bakterije bacteria bakterije bacteria GCTGCCTCCCGTAGGAGT **30 Amann in sod., 1990a TGAGCCAGGATCAAACTCT 30 Weisburg in sod., 1991 oksidatorji amonija NSO190 CGATCCCCTGCTTTTCTCC 55 Mobarry in sod., ammonia-oxidizing bacteria * Količina formamida v hibridizacijskem pufru. Formamide concentration in the hybridization buffer. ** Pri hibridizacijah z več sondami je koncentracija formamida ustrezala sondi, ki potrebuje več formamida. When more probes were used in hibridization formamide concentration suited the probe with higher formamid recquirement. Tripansko modro (Mosiman in sod., 1997) Za poskuse s tripansko modrim smo po končani hibridizaciji vzorec centrifugirali in dodali 1ml ledeno hladne raztopine tripansko modrega v PBS s koncentracijo 1µg/ml. Vzorec smo inkubirali 10 min pri 4 C. Po inkubaciji smo vzorec analizirali s pretočnim citometrom. Pretočna citometrija Analiza je potekala na aparatu FACScan (Becton Dickinson). Hibridizirani vzorec smo po potrebi redčili (od 1:1 do 1:5) s PBS, ph 8,0, tako da je analiza potekala s približno 500 dogodki na sekundo pri večji hitrosti (60 µl m 7 µl/min) in približno 200 dogodki na sekundo pri manjšem pretoku vzorca (12 µl m 3 µl/min). Izvor svetlobe je bil 15mW argonski laser, ki obratuje pri 488nm. Uporabljali smo štiri detektorje: za prednji odboj je to fotodioda, za stranski odboj in obe fluorescenci pa so to fotopomnoževalke. Za detekcijo fluorokroma FITC smo uporabljali filter 530/30 BP (FL1), za detekcijo Cy3 pa 585/42 BP (FL2). Meritve smo opravili s standardno programsko opremo (CELLQuest v3.1) na računalniku Power Macintosh Natančnost ločevanja je bila za vse štiri parametre 256 ali 1024 kanalov. Signal je bil na koncu še primerno linearno ali logaritemsko elektronsko ojačan. REZULTATI IN RAZPRAVA Ločitev celic od ostalih delcev v vzorcu smo dosegli s hibridizacijo bakterij z oligonukleotidno sondo EUB338, ki je označena s fluorokromom Cy3. Fluorescenco le-tega smo merili z detektorjem FL2. Na tem detektorju smo postavili tudi prag, s čimer smo iz analize izključili vse dogodke, ki zagotovo niso predstavljali celic. Ker smo poleg odkrivanja in štetja 116
5 vseh mikrobnih celic želeli predvsem razviti metodo, s katero bi vzorec hkrati hibridizirali s specifičnimi sondami označenimi s fluorokromom FITC, ki ga zaznavamo z detektorjem FL1, in s tem kvantificirali posamezne skupine bakterij v vzorcu, so rezultati predstavljeni na diagramu zelene (FL1) in oranžne (FL2) fluorescence. Na grafikonu 1 je prikazan rezultat analize nehibridiziranega vzorca. Grafikon 1. Pretočno citometrijska analiza nehibridiziranega vzorca aktivnega blata. Graph 1. Flow cytometric analysis of activated sludge sample. Grafikon 2. Pretočno citometrijska analiza oligonukleotidno sondo EUB338, označeno s Cy3. Graph 2. Flow cytometric analysis of activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probe EUB 338, labelled with Cy3. Delci v vzorcu avtofluorescirajo tako oranžno kot zeleno. Na grafikonu 2 je prikazan rezultat analize istega vzorca, hibridiziranega s sondo EUB338-Cy3. Nastavitve aparata so enake pri vseh meritvah, zato lahko grafikone neposredno primerjamo. Jakost oranžne fluorescence večine dogodkov se je povečala, izstopa pa skupina dogodkov v zgornjem levem kvadrantu. Najenostavneje smo to skupino dogodkov, ki smo jih spoznali za mikrobne celice, omejili od ostalih na diagramu oranžne fluorescence in stranskega odboja, kot je prikazano na grafikonu 3. Na tem diagramu se položaj celic ne spremeni v primeru, ko je vzorec hibridiziran še s sondo označeno s FITC, zato smo tu postavili vrata "vse celice". Na grafikonu 4 so prikazani le dogodki znotraj teh vrat. Na osnovi podanih rezultatov in rezultatov hibridizacije še z drugo, za vse bakterije specifično sondo (fd1, označeno s FITC), smo določili vrata "FITC -" in FITC +". Na grafikonu 5 so prikazane celice hibridizirane le s sondo EUB338, na grafikonu 6, pa celice hibridizirane z obema sondama. Na grafikonu 5 vidimo, da sta lažno pozitivna le 2 dogodka, kar predstavlja 0,25% vseh. Iz grafikona 6 lahko razberemo, da večina celic po hibridizaciji intenzivno fluorescira v območju detektorja FL1. Del populacije ostane znotraj vrat "FITC -". Očitno je, da del populacije, ki je hibridiziral s sondo EUB388, pri danih pogojih hibridizacije ni hibridiziral s sondo fd1. To, da se je jakost fluorescence povečala tudi tem celicam, lahko razložimo s pojavom nepravilne vezave s FITC obarvanih sond. Ta razlaga se sklada tudi z v nadaljevanju predstavljenimi ugotovitvami. 117
6 vse celice Grafikon 3. Prikaz izbire vrat vse celice za ločitev celic od ostalih dogodkov. Graph 3. Cells were separated from other events with gates vse celice. Grafikon 4. Pretočno citometrijska analiza oligonukleotidno sondo EUB338, označeno s Cy3. Prikazani so le dogodki znotraj vrat "vse celice". Graph 4. Flow cytometric analysis of activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probe EUB 338, labelled with Cy3. Only events inside the gate vse celice are shown. FITC - FITC - FITC + FITC + Grafikon 5. Pretočno citometrijska analiza oligonukleotidno sondo EUB338, označeno s Cy3. Prikazana je postavitev vrat FITC + in FITC na podlagi rezultatov na grafikonih 5 in 6. Graph 5. Flow cytometric analysis of activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probe EUB 338, labelled with Cy3. Gates FITC + and FITC were set after examination of graph 5 and 6. Grafikon 6. Pretočno citometrijska analiza oligonukleo-tidnima sondama EUB338, označeno s Cy3, in fd1, označeno s FITC. Prikazana je postavitev vrat FITC + in FITC na podlagi rezultatov na grafikonih 5 in 6. Graph 6. Flow cytometric analysis of activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probes EUB 338, labelled with Cy3 and fd1, labelled with FITC. Gates FITC + and FITC were set after examination of graph 5 and
7 TB brez TB no TB TB brez TB no TB Grafikon 7. Pretočno citometrijska analiza oligonukleotidno sondo EUB338, označeno s Cy3. Neprekinjena črta prikazuje celice, barvane s tripansko modrim (TB), prekinjena pa nebarvane (brez TB). Graph 7. Flow cytometric analysis of activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probe EUB 338, labelled with Cy3. Solid line represents cells treated with Tripan Blue (TB), dashed one represents untreated cells (no TB). Grafikon 8. Pretočno citometrijska analiza oligonukleotidnima sondama EUB338, označeno s Cy3 in fd1, označeno s FITC. Neprekinjena črta prikazuje celice barvane s tripansko modrim (TB), prekinjena pa nebarvane. Graph 8. Flow cytometric analysis of the activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probes EUB 338, labelled with Cy3 and fd1, labelled with FITC. Solid line represents cells treated with Tripan Blue (TB), dashed one represents untreated cells (no TB). FITC - FITC + Grafikon 9. Graph 9. Analiza vzorca aktivnega blata hibridiziranega s sondo NSO190, označeno s FITC. Analysis of the activated sludge sample after hybridization with oligonucleotide probe NSO190. Da bi preprečili FITC pozitivne dogodke, ki bi bili posledica avtofluorescence in da bi jasneje ločili specifično hibridizirane celice od nespecifične fluorescence, smo v našem modelu preizkusili metodo, ki so jo na humanih limfocitih razvili Mosiman in sodelavci (1997). Ugotovili so, da tripansko modro znižuje celično avtofluorescenco in nespecifično fluorescenco, ne vpliva pa na fluorescenco specifično hibridiziranih celic. Rezultate našega dela prikazujemo 119
8 na grafikonih 7 in 8. Prvi histogram prikazuje primerjavo jakosti zelene fluorescence med s tripansko modro barvanimi in nebarvanimi celicami. Prikazani so le dogodki znotraj vrat "vse celice". V obeh primerih smo celice najprej hibridizirali s sondo EUB338-Cy3. Vidimo lahko, da se je jakost avtofluorescence po uporabi tripansko modrega zmanjšala. Na drugem histogramu je narejena enaka primerjava, le da so v tem primeru celice hibridizirane s sondama EUB338-Cy3 in FD1-FITC. Vrh močneje fluorescirajočih celic se po obdelavi s tripansko modrim skoraj ne premakne, medtem ko se fluorescenca šibkeje fluorescirajočih celic zmanjša. Na grafikonu 9 so predstavljeni rezultati analize aktivnega blata s sondo značilno za kemolitotrofne oksidatorje amonija, ki pripadajo β- podskupini proteobakterij, z zgoraj opisano metodo. Omenjena analiza je pokazala, da je v vzorcu aktivnega blata iz sekvenčnega reaktorja 16,3% bakterij, ki jih je prepoznala sonda NSO190. Največje težave pri tovrstni analizi so povezane z razbitjem flokul do posameznih celic in nadaljnjo ločitvijo celic od ostankov flokul. To je tudi vzrok za veliko število dogodkov pri analizi, ki se ne odzivajo na hibridizacijo tako kot celice. Poleg izboljšanja priprave vzorca bo potrebno v prihodnje s čistimi kulturami in s primerjalno metodo (naprimer mikroskopskim štetjem) ugotoviti natančnost opisane metode POVZETEK Klasično mikrobiološko določanje števila bakterij v aktivnem blatu z gojitvenimi tehnikami je večinoma neprimerno, še posebej kadar nas zanima število bakterij v posameznih bakterijskih skupinah (naprimer vrstah, rodovih, itn.). Kombinacija pretočne citometrije in hibridizacije in situ je dokaj nov pristop k proučevanju mikrobnih združb. Z oligonukleotidnimi sondami, ki so komplementarne odsekom ribosomske RNK lahko označimo različne bakterijske skupine. Fluorescenco fluorokroma, s katerim vnaprej označimo sonde, lahko zaznajo detektorji pretočnega citometra. Ti lahko merijo tudi več signalov posamezne celice hkrati s hitrostjo nekaj sto celic v sekundi. Sondo EUB338, specifično za vse bakterije, smo uporabili za ločevanje bakterijskih celic od drugih delcev. To sondo, označeno s fluorokromom Cy3, smo zaznavali z detektorjem FL2. Drugi detektor (FL1) smo uporabili za merjenje intenzitete fluorescence sond, označenih s fluorokromom FITC. Z uporabo različno specifičnih sond, označenimi s FITC, skupaj z eubakterijsko sondo, označeno s Cy3, lahko kvantificiramo bakterijske subpopulacije v aktivnem blatu. Sonda NSO190, označena s FITC, specifična za kemolitotrofne oksidatorje amonija, ki pripadajo β- podskupini proteobakterij, s katero smo analizirali vzorec aktivnega blata, je prepoznala 16,3% odstotka bakterij. Velik problem pri analizi aktivnega blata predstavlja avtofluorescenca. Da bi znižali jakost avtofluorescence, smo v zgoraj opisanem sistemu preizkusili učinek tripansko modrega. Ta je, tako kot v že opisanih poskusih, znižal nivo avtofluorescence in nespecifične fluorescence, ni pa vplival na fluorescenco FITC. SUMMARY Viable plate counts and other classical microbiological techniques are not suitable for enumerating bacterial populations in activated sludge, specially when we want to analyze specific microbial subpopulations. A combination of flow cytometry and in situ hybridization is a relatively new approach to microbial community structure analysis. Different bacterial subpopulations can be marked with oligonucleotide probes that target ribosomal RNA segments. Probes which are fluorescently labelled can than be detected with flow cytometer. Its detectors 120
9 can analyze more than one fluorescent signal from one cell simultaneously, with pace of several hundred cells per second. Probe EUB338, specific for all bacteria, was used for separating bacterial cells from other events. This probe, labelled with Cy3 was detected by FL2 detector. Second detector (FL1) was used for detection of probes labelled with FITC. With application of probes, specific for different bacterial groups and labelled with FITC, simultaneously with Cy3 labelled eubacterial probe, it is possible to enumerate bacterial subpopulations in activated sludge. Probe NSO190, labelld with FITC, specific for amonia oxidizing bacteria from β- subclass of Proteobacteria detected 16.3% of all bacteria in analyzed sample. Autofluorescence represents an obstacle in activated sludge analysis. In order to depress the level of autofluorescence in model described above, effects of tripan blue were investigated. As in previously described models, tripan blue did not alter the FITC-probe-specific fluorescence, while the level of autofluorescence and nonspecific fluorescence dropped. ZAHVALA Delo sta s sofinanciranjem nakupa pretočnega citometra omogočila Centralna čistilna naprava Kamnik - Domžale in Ministrstvo za kmetijstvo, gozdarstvo in prehrano R Slovenije. VIRI Amann, R.I./ Krumholz, L./ Stahl, D.A.. Fluorescent-oligonucleotide probing of whole cells for determinative, phylogenetic and enviromental studies in microbiology. J. Bacteriol., 172(1990a), Amann, R.I./ Binder, B.J./ Olson, R.J./ Chisholm, W./ Devereux, R./ Stahl, D.A. Combination of 16S rrnatargeted oligonucleotide probes with flow cytometry for analyzing mixed microbial populations. Appl. Environ. Microbiol. 56(1990b), Brock, T.D./ Madigan, M.T./ Martinko, J.M./ Parker. J. Biology of microorganisms. 7th. ed. Englewood Cliffs, New Yersey, Prentice-Hall International, Inc. 1994,904 s. Davey, H.M./ Kell, D.B. Flow cytometry and cell sorting of heterogeneous microbial populations: the importance of single-cell analyses. Microbiol. Rev., 60(1996), Holben, W.E./ Noto, K./ Sumino, T./ Suwa, Y. Molecular analysis of bacterial communities in a three-compartment granular activated sludge system indicates community-level control by incompatible nitrification processes. Appl. Environ. Microbiol., 64(1998), Juretschko, S./ Timmermann, G./ Schmid, M./ Schleifer, K.H./ Pommerening-Röser, A./ Koops, H.P./ Wagner, M. Combined molecular and conventional analyses of nitrifying bacterium diversity in activated sludge: Nitrosococcus mobilis and Nitrospira-like bacteria as dominant populations. Appl. Environ. Microbiol., 64(1998), Manz, W./ Amann, R./ Ludwig, W./ Wagner, M./ Schleifer, K.H. Phylogenetic oligodeoxynucleotide probes for the major subclasses of proteobacteria: problems and solutions. Syst. Appl. Microbiol. 15(1992), Mobarry, B.K./ Wagner, M./ Urbain, B./ Rittmann, B.E./ Stahl, D.A. Phylogenetic probes for analyzing abundance and spatial organisation of nitrifying bacteria. Appl.Environ. Microbiol., 62(1996), Mosiman, L.V./ Petterson, K.B./ Canterero, L./ Goolsby, L.C. Reducing cellular autofluorescence in flow cytometry: an in situ method. Cytometry(Communications in clinical cytometry), 30(1997), Prinčič, A./ Mahne, I./ Megušar, F./ Poul, E.A./ Tiedje, J.M. Effects of ph and oxygen and ammonium concentrations on the community structure of nitrifying bacteria from wastewater. Appl. Environ. Microbiol., 64(1998), Sharpless, T.K./ Bartholdi, M./ Melamed, M.R. Size and refractive index dependence of simple forward angle scattering measurements in a flow system using sharply-focused illumination. J. Histochem. Cytochem., 25(1977), Wagner, M./ Amann, R./ Lemmer, H./ Schleifer, K. H.. Probing activated sludge with proteobacteria-specific oligonucleotides: inadequacy of culture-dependent methods for describing microbial community structure. Appl. Environ. Microbiol., 59(1993), Wallner, G./ Erhart, R./ Amann, R. Flow cytometric analysis of activated sludge with ribosomal RNA targeted probes. Appl. Environ. Microbiol., 61(1995),
10 Weisburg, W.G./ Barns, S.M./ Pelletier, D.A./ Lane, D.J.. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J. Bacteriol., 173(1991), Woese, C.R.. Bacterial evolution. Microbiol. Rev. 51(1987),
Slide 1
Slide 1 OBDELAVA ODPADNE VODE Slide 2 KAKO POVRNITI PORUŠENI EKOSITEM V PRVOTNO STANJE? KAKO POVRNITI PORUŠENI EKOSITEM V PRVOTNO STANJE?! uravnavanje ph, alkalnosti! odstranjevanje ali dodajanje elementov!
Prikaži večDELOVANJE KATALIZATORJEV Cilji eksperimenta: Opazovanje delovanja encima katalaze, ki pospešuje razkroj vodikovega peroksida, primerjava njenega delov
DELOVANJE KATALIZATORJEV Cilji eksperimenta: Opazovanje delovanja encima katalaze, ki pospešuje razkroj vodikovega peroksida, primerjava njenega delovanja z delovanjem nebeljakovinskih katalizatorjev in
Prikaži večAvtomatizirano modeliranje pri celostnem upravljanju z vodnimi viri
Univerza v Ljubljani Fakulteta za gradbeništvo in geodezijo 36. Goljevščkov spominski dan Modeliranje kroženja vode in spiranja hranil v porečju reke Pesnice Mateja Škerjanec 1 Tjaša Kanduč 2 David Kocman
Prikaži večOptotek – inovacije v medicini in znanosti
Projekt DALJDET Lidar za detekcijio elastičnih in fluorescentnih signalov v IR in UV svetlobnem spektru. Ljubljansko podjetje Optotek je v okviru javnega razpisa MIR 06/RR/07, ki je potekal pod okriljem
Prikaži več1 EKSPERIMENTALNI DEL 1.1 Tkanina Pri pranju smo uporabili pet tkanin, od katerih je bila ena bela bombažna tkanina (B), preostale tkanine (E101, E111
1 EKSPERIMENTALNI DEL 1.1 Tkanina Pri pranju smo uporabili pet tkanin, od katerih je bila ena bela bombažna tkanina (B), preostale (E101, E111, E114 in E160) pa so bile zamazane z različnimi umazanijami
Prikaži večAtomska spektroskopija PROSTI ATOMI VZBUJENI ATOMI Marjan Veber Metode atomske/elementne masne/ spektrometrije Elektronska konfiguracija Mg
Atomska spektroskopija PROSTI ATOMI VZBUJENI ATOMI Metode atomske/elementne masne/ spektrometrije Elektronska konfiguracija Mg Mg e 1s 2s2p 3d 4s 3p 3s e Po dogovoru ima osnovno elektronsko stanje energijo
Prikaži večPowerPoint Presentation
Lasersko obarvanje kovin Motivacija: Z laserskim obsevanjem je možno spremeniti tudi barvo kovinskih površin, kar odpira povsem nove možnosti označevanja in dekoracije najrazličnejših sestavnih delov in
Prikaži večMicrosoft Word - A-3-Dezelak-SLO.doc
20. posvetovanje "KOMUNALNA ENERGETIKA / POWER ENGINEERING", Maribor, 2011 1 ANALIZA OBRATOVANJA HIDROELEKTRARNE S ŠKOLJČNIM DIAGRAMOM Klemen DEŽELAK POVZETEK V prispevku je predstavljena možnost izvedbe
Prikaži večMicrosoft Word - SI_vaja1.doc
Univerza v Ljubljani, Zdravstvena fakulteta Sanitarno inženirstvo Statistika Inštitut za biostatistiko in medicinsko informatiko Š.l. 2011/2012, 3. letnik (1. stopnja), Vaja 1 Naloge 1. del: Opisna statistika
Prikaži večŠTEVCI PROMETA IN NJIHOVA UPORABA ZA NAMENE STATISTIK ČRT GRAHONJA
ŠTEVCI PROMETA IN NJIHOVA UPORABA ZA NAMENE STATISTIK ČRT GRAHONJA Navdih Poizvedovanje po BD podatkovnih virih, ki imajo časovno dimenzijo in so dostopni. Večji promet pomeni večje število dobrin in močnejšo
Prikaži večPowerPoint Presentation
Letna konferenca Katedre za Biotehnologijo POMEN BIOTEHNOLOGIJE IN MIKROBIOLOGIJE ZA PRIHODNOST: VODA 18-19.1.2007 Definiranje okolja mikroorganizmov David Stopar Izr. prof. dr. David Stopar Univerza v
Prikaži večPAST CONTINUOUS Past continuous uporabljamo, ko želimo opisati dogodke, ki so se dogajali v preteklosti. Dogodki so se zaključili v preteklosti in nič
PAST CONTNUOUS Past continuous uporabljamo, ko želimo opisati dogodke, ki so se dogajali v preteklosti. Dogodki so se zaključili v preteklosti in nič več ne trajajo. Dogodki so v preteklosti trajali dalj
Prikaži večTraining
Svetovalna pisarna Drago Dretnik 2016 Namen Svetovalne pisarne je nuditi strokovno pomoč planinskim društvom na naslednjih področjih: sistemi za ravnanje z odpadno vodo vodooskrbni sistemi energetski sistemi
Prikaži večPRESENT SIMPLE TENSE The sun gives us light. The sun does not give us light. Does It give us light? Raba: Za splošno znane resnice. I watch TV sometim
PRESENT SIMPLE TENSE The sun gives us light. The sun does not give us light. Does It give us light? Za splošno znane resnice. I watch TV sometimes. I do not watch TV somtimes. Do I watch TV sometimes?
Prikaži večLaTeX slides
Statistični modeli - interakcija - Milena Kovač 23. november 2007 Biometrija 2007/08 1 Število živorojenih pujskov Biometrija 2007/08 2 Sestavimo model! Vplivi: leto, farma Odvisna spremenljivka: število
Prikaži večNa podlagi 41
Na podlagi 41. in 81. člena Odloka o odvajanju in čiščenju komunalne in padavinske odpadne vode na območju Občine Kriţevci (Uradni list RS, št. 18/2010, 53/2010) ter 17. člena Odloka o ustanovitvi Javnega
Prikaži večSpecifikacija obračuna - GoSoft
Poročilo o izvedeni nalogi Komunala Cerknica, d.o.o. - spremljanje zdravstvene ustreznosti pitne vode Evidenčna oznaka: 2132-1920157-1944862 08.10.21207 Naročnik: JAVNO PODJETJE KOMUNALA CERKNICA D.O.O.
Prikaži večinnbox_f60_navodila.indd
Osnovna navodila Komunikacijski prehod Innbox F60 SFP AC Varnostna opozorila Pri uporabi opreme upoštevajte naslednja opozorila in varnostne ukrepe. Da bi v največji meri izkoristili najnovejšo tehnologijo
Prikaži večLABORATORIJSKE VAJE IZ FIZIKE
UVOD LABORATORIJSKE VAJE IZ FIZIKE V tem šolskem letu ste se odločili za fiziko kot izbirni predmet. Laboratorijske vaje boste opravljali med poukom od začetka oktobra do konca aprila. Zunanji kandidati
Prikaži večMicrosoft Word - SI_vaja5.doc
Univerza v Ljubljani, Zdravstvena fakulteta Sanitarno inženirstvo Statistika Inštitut za biostatistiko in medicinsko informatiko Š.l. 2011/2012, 3. letnik (1. stopnja), Vaja 5 Naloge 1. del: t test za
Prikaži večMicrosoft Word - Pr08VOKA_Celje_Klanc.doc
ZAVOD ZA ZDRAVSTVENO VARSTVO MARIBOR Prvomajska ulica 1, 2000 Maribor http://www.zzv-mb. INŠTITUT ZA VARSTVO OKOLJA (02) 4500170 (02) 4500227 ivo@zzv-mb. Telefon: Telefaks: E-pošta: ID za DDV: SI30447046
Prikaži večZdravljenje raka debelega črevesa in danke Pomen napovednih bioloških označevalcev RAS slovenija
Zdravljenje raka debelega črevesa in danke Pomen napovednih bioloških označevalcev RAS slovenija Izdalo: Združenje Europacolon Slovenija Strokovni pregled vsebine: doc. dr. Janja Ocvirk dr. med. Pozdravljeni,
Prikaži večPowerPoint Presentation
Tehnološki izzivi proizvodnja biometana in njegovo injiciranje v plinovodno omrežje prof. dr. Iztok Golobič Predstojnik Katedre za toplotno in procesno tehniko Vodja Laboratorija za toplotno tehniko Fakulteta
Prikaži večPriloga 1: Poročilo o pregledu Firma izvajalca javne službe: Sedež izvajalca javne službe: ID za DDV: Matična številka izvajalca javne službe: POROČIL
Priloga 1: Poročilo o pregledu Firma izvajalca javne službe: Sedež izvajalca javne službe: ID za DDV: Matična številka izvajalca javne službe: POROČILO O PREGLEDU MALE KOMUNALNE ČISTILNE NAPRAVE Z ZMOGLJIVOSTJO,
Prikaži več10. Vaja: Kemijsko ravnotežje I a) Osnove: Poznamo enosmerne in ravnotežne kemijske reakcije. Za slednje lahko pišemo določeno konstanto kemijskega ra
10. Vaja: Kemijsko ravnotežje I a) Osnove: Poznamo enosmerne in ravnotežne kemijske reakcije. Za slednje lahko pišemo določeno konstanto kemijskega ravnotežja (K C ), ki nam podaja konstantno razmerje
Prikaži večPOROČILO O IZVAJANJU OBVEZNE GOSPODARSKE JAVNE ČIŠČENJA KOMUNALNE IN PADAVINSKE ODPADNE VODE ZA LETO 2015 ZA OBČINE DOMŽALE, KAMNIK, MENGEŠ, KOMENDA,
POROČILO O IZVAJANJU OBVEZNE GOSPODARSKE JAVNE ČIŠČENJA KOMUNALNE IN PADAVINSKE ODPADNE VODE ZA LETO 2015 ZA OBČINE DOMŽALE, KAMNIK, MENGEŠ, KOMENDA, TRZIN IN CERKLJE NA GORENJSKEM / april 2016 / direktorica
Prikaži večAlbert Einstein in teorija relativnosti
Albert Einstein in teorija relativnosti Rojen 14. marca 1879 v judovski družini v Ulmu, odraščal pa je v Münchnu Obiskoval je katoliško osnovno šolo, na materino željo se je učil igrati violino Pri 15
Prikaži večSLO NAVODILA ZA UPORABO IN MONTAŽO Kat. št.: NAVODILA ZA UPORABO Merilnik ogljikovega monoksida Testo Kataloška št.: 10 1
SLO NAVODILA ZA UPORABO IN MONTAŽO Kat. št.: 10 16 57 www.conrad.si NAVODILA ZA UPORABO Merilnik ogljikovega monoksida Testo 317 3 Kataloška št.: 10 16 57 KAZALO NAMEN UPORABE...3 TEHNIČNI PODATKI...3
Prikaži več7. VAJA A. ENAČBA ZBIRALNE LEČE
7. VAJA A. ENAČBA ZBIRALNE LEČE 1. UVOD Enačbo leče dobimo navadno s pomočjo geometrijskih konstrukcij. V našem primeru bomo do te enačbe prišli eksperimentalno, z merjenjem razdalj a in b. 2. NALOGA Izračunaj
Prikaži večDiapozitiv 1
Vhodno izhodne naprave Laboratorijska vaja 5 - LV 1 Meritve dolžine in karakteristične impedance linije VIN - LV 1 Rozman,Škraba, FRI Model linije Rs Z 0, Vs u i u l R L V S - Napetost izvora [V] R S -
Prikaži večOsnove statistike v fizični geografiji 2
Osnove statistike v geografiji - Metodologija geografskega raziskovanja - dr. Gregor Kovačič, doc. Bivariantna analiza Lastnosti so med sabo odvisne (vzročnoposledično povezane), kadar ena lastnost (spremenljivka
Prikaži večSpecifikacija obračuna - GoSoft
Poročilo o izvedeni nalogi Spremljanje zdravstvene ustreznosti pitne vode - Pomurski vodovod krak A Evidenčna oznaka: 2141a-14/8024-17/46560 14.05.62276 EKO-PARK D.O.O. LENDAVA, JAVNO PODJETJE OKO-PARK
Prikaži večFIZIKA IN ARHITEKTURA SKOZI NAŠA UŠESA
FIZIKA IN ARHITEKTURA SKOZI NAŠA UŠESA SE SPOMNITE SREDNJEŠOLSKE FIZIKE IN BIOLOGIJE? Saša Galonja univ. dipl. inž. arh. ZAPS marec, april 2012 Vsebina Kaj je zvok? Kako slišimo? Arhitekturna akustika
Prikaži večMicrosoft Word - ARRS-MS-BR-07-A-2009.doc
RAZPIS: Javni razpis za sofinanciranje znanstvenoraziskovalnega sodelovanja med Republiko Slovenijo in Federativno Republiko Brazilijo v letih 2010 2012 (Uradni list RS št. 53/2009) Splošna opomba: Vnosna
Prikaži večNavodila za uporabo Mini prenosna HD kamera s snemalnikom
Navodila za uporabo Mini prenosna HD kamera s snemalnikom www.spyshop.eu Izdelku so priložena navodila v angleščini, ki poleg teksta prikazujejo tudi slikovni prikaz sestave in delovanja izdelka. Lastnosti
Prikaži večČlen 11(1): Frekvenčna območja Frekvenčna območja Časovna perioda obratovanja 47,0 Hz-47,5 Hz Najmanj 60 sekund 47,5 Hz-48,5 Hz Neomejeno 48,5 Hz-49,0
Člen 11(1): Frekvenčna območja Frekvenčna območja Časovna perioda obratovanja 47,0 Hz-47,5 Hz Najmanj 60 sekund 47,5 Hz-48,5 Hz Neomejeno 48,5 Hz-49,0 Hz Neomejeno 49,0 Hz-51,0 Hz Neomejeno 51,0 Hz-51,5
Prikaži večDiapozitiv 1
ZAHTEVE TENIŠKE IGRE V tej predstavitvi bomo... Analizirali teniško igro z vidika fizioloških procesov Predstavili energijske procese, ki potekajo pri športni aktivnosti Kako nam poznavanje energijskih
Prikaži večMicrosoft Word - M docx
Državni izpitni center *M1180314* SPOMLADANSKI IZPITNI ROK Izpitna pola Modul gradbeništvo NAVODILA ZA OCENJEVANJE Četrtek, 14. junij 01 SPLOŠNA MATURA RIC 01 M11-803-1-4 IZPITNA POLA Modul gradbeništvo
Prikaži več5.VAJA RAZMERJE MED HITROSTJO DIFUZIJE IN VELIKOSTJO CELICE
5.VAJA RAZMERJE MED HITROSTJO DIFUZIJE IN VELIKOSTJO CELICE UVOD Celica, kateri smo se posvetili pri laboratorijskem delu, je osnovna gradbena enota vsakega živega bitja ali pa že ena sama predstavlja
Prikaži večMicrosoft Word - sia_s_fluoridno_2006.doc
Univerza v Ljubljani Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo Univerzitetni študijski program Kemija Izbirni sklop Analizna kemija Avtomatizirana analiza Seminar 2006 Predavatelj: prof. dr. Boris Pihlar
Prikaži večBeoLab 12 BeoLab 12 2 BeoLab 12 3
BeoLab 12 BeoLab 12 2 BeoLab 12 3 Pridržujemo si pravico do sprememb tehničnih podatkov, podatkov o lastnostih izdelkov in njihovi uporabi, ki jih navaja ta priročnik, brez predhodnega obvestila. Različica
Prikaži večNaloge 1. Dva električna grelnika z ohmskima upornostma 60 Ω in 30 Ω vežemo vzporedno in priključimo na idealni enosmerni tokovni vir s tokom 10 A. Tr
Naloge 1. Dva električna grelnika z ohmskima upornostma 60 Ω in 30 Ω vežemo vzporedno in priključimo na idealni enosmerni tokovni vir s tokom 10 A. Trditev: idealni enosmerni tokovni vir obratuje z močjo
Prikaži večUREDBA KOMISIJE (EU) 2017/ z dne 3. marca o spremembi Priloge I k Uredbi (ES) št. 1334/ Evropskega parlamenta in
L 58/14 SL UREDBA KOMISIJE (EU) 2017/378 z dne 3. marca 2017 o spremembi Priloge I k Uredbi (ES) št. 1334/2008 Evropskega parlamenta in Sveta glede uporabe nekaterih aromatičnih snovi (Besedilo velja za
Prikaži večMicrosoft Word - Pr08VOKA_Celje_Dobrna.doc
ZAVOD ZA ZDRAVSTVENO VARSTVO MARIBOR Prvomajska ulica 1, 2000 Maribor http://www.zzv-mb. INŠTITUT ZA VARSTVO OKOLJA (02) 4500170 (02) 4500227 ivo@zzv-mb. Telefon: Telefaks: E-pošta: ID za DDV: SI30447046
Prikaži več10. Meritev šumnega števila ojačevalnika Vsako radijsko zvezo načrtujemo za zahtevano razmerje signal/šum. Šum ima vsaj dva izvora: naravni šum T A, k
10. Meritev šumnega števila ojačevalnika Vsako radijsko zvezo načrtujemo za zahtevano razmerje signal/šum. Šum ima vsaj dva izvora: naravni šum T A, ki ga sprejme antena in dodatni šum T S radijskega sprejemnika.
Prikaži večPoročilo za 1. del seminarske naloge- igrica Kača Opis igrice Kača (Snake) je klasična igrica, pogosto prednaložena na malce starejših mobilnih telefo
Poročilo za 1. del seminarske naloge- igrica Kača Opis igrice Kača (Snake) je klasična igrica, pogosto prednaložena na malce starejših mobilnih telefonih. Obstaja precej različic, sam pa sem sestavil meni
Prikaži večPoročilo o izvedeni nalogi
Poročilo o izvedeni nalogi Evidenčna oznaka: 2163-00/18228-17/40464 06.06.13140 Naročnik: JKP ŠENTJUR, JAVNO KOMUNALNO PODJETJE, D.O.O. CESTA LEONA DOBROTINŠKA 18 Izvajalci: Oddelek za okolje in zdravje
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - −omen_Baènik
Strupene kovine v izobraževanju kaj in kako? Andreja Bačnik, ZRSŠ Agnes Šömen Joksić, ZZV Koper Vsebina Opravimo z izrazom težke kovine Razmejimo: elementi kovine strupene kovine Biogeokemijsko kroženje
Prikaži več15. Seminar Optične Komunikacije Laboratorij za Sevanje in Optiko Fakulteta za Elektrotehniko Ljubljana, 30.jan - 1.feb 2008 Osnovne omejitve svetlobn
15. Seminar Optične Komunikacije Laboratorij za Sevanje in Optiko Fakulteta za Elektrotehniko Ljubljana, 30.jan - 1.feb 2008 Osnovne omejitve svetlobnega vlakna Matjaž Vidmar Seznam prosojnic: Slika 1
Prikaži večFOR SMARTER PEOPLE TAKO SE VLOMI PREPREČUJEJO DANES REHAU Smart Guard System plus preventivna protivlomna zaščita WINDOWS. REINVENTED FOR MODERN LIFE.
FOR SMARTER PEOPLE TAKO SE VLOMI PREPREČUJEJO DANES REHAU Smart Guard System plus preventivna protivlomna zaščita WINDOWS. REINVENTED FOR MODERN LIFE. NA NOVO ZASNOVANA OKNA Za današnje življenje Naše
Prikaži večMicrosoft Word - GorivnaCelica_h-tec10.doc
Univerza v Ljubljani Fakulteta za strojništvo Aškerčeva 6 1000 Ljubljana, Slovenija telefon: 01 477 12 00 faks: 01 251 85 67 www.fs.uni-lj.si e-mail: dekanat@fs.uni-lj.si Katedra za energetsko strojništvo
Prikaži več(Microsoft Word - 3. Pogre\232ki in negotovost-c.doc)
3.4 Merilna negotovost Merilna negotovost je parameter, ki pripada merilnem rezltat. Označje razpršenost vrednosti, ki jih je mogoče z določeno verjetnostjo pripisati merjeni veličini. Navaja kakovost
Prikaži več(Microsoft PowerPoint - Poroèilo o pitni vodi - Ravne 2017 [Samo za branje] [Združljivostni naèin])
NA OBMOČJU OBČINE RAVNE NA KOROŠKEM - 2017 Na območju občine Ravne na Koroškem se za 8834 uporabnikov pitna voda dobavlja iz 3 sistemov za oskrbo s pitno vodo: VS ŠUMC, VS Kotlje-Ravne in VS Strojna. Upravljavec
Prikaži večARRS-BI-FR-PROTEUS-JR-Prijava/2011 Stran 1 od 7 Oznaka prijave: Javni razpis za sofinanciranje znanstvenoraziskovalnega sodelovanja med Republiko Slov
Stran 1 od 7 Oznaka prijave: Javni razpis za sofinanciranje znanstvenoraziskovalnega sodelovanja med Republiko Slovenijo in Francosko republiko Program PROTEUS v letih 2012-2013 (Uradni list RS, št. 10/2011,
Prikaži večPOROČILO O VAJI: IZDIHAVANJE CO2 PRI ČLOVEKU
POROČILO O VAJI: FOTOSINTETSKA BARVILA V LISTIH RASTLIN Jan Vogler, 4.h, GIMB 1 UVOD Pri pouku biologije smo delali vajo z naslovom fotosintetska barvila v listih rastlin. Cilji vaje: dokazati da so v
Prikaži večPS v luci NUV_Mohorko_GZS_
Prednostne snovi v luči Načrta upravljanja voda 2009 do 2015 Dr. Tanja Mohorko, uni. dipl. inž. kem. inž. Ljubljana, 03.07.2012 Pregled predstavitve Evropska zakonodaja za področje prednostnih snovi Metodologija
Prikaži večGorivna celica
Laboratorij za termoenergetiko Delovanje gorivnih celic Najbolj uveljavljeni tipi gorivnih celic Obstaja veliko različnih vrst gorivnih celic, najpogosteje se jih razvršča glede na vrsto elektrolita Obratovalna
Prikaži večNEVTRIN d.o.o. Podjetje za razvoj elektronike, Podgorje 42a, 1241 Kamnik, Slovenia Telefon: Faks.: in
NEVTRIN d.o.o. Podjetje za razvoj elektronike, Podgorje 42a, 1241 Kamnik, Slovenia Telefon: +386 1 729 6 460 Faks.: +386 1 729 6 466 www.nevtrin.si info@elektrina.si USB RFID READER Navodila za uporabo?
Prikaži večPoročilo o izvedeni nalogi, ver.1.4
Poročilo o izvedeni nalogi Hydrovod, d.o.o. - spremljanje zdravstvene ustreznosti pitne vode Evidenčna oznaka: 2132-17/19433-18/18890 06.02.18415 Naročnik: HYDROVOD D.O.O., DRUŽBA ZA KOMUNALNO DEJAVNOST
Prikaži večM-Tel
Poročilo o meritvah / Test report Št. / No. 16-159-M-Tel Datum / Date 16.03.2016 Zadeva / Subject Pooblastilo / Authorization Meritve visokofrekvenčnih elektromagnetnih sevanj (EMS) Ministrstvo za okolje
Prikaži večSLO NAVODILA ZA UPORABO IN MONTAŽO Kat. št.: NAVODILA ZA UPORABO Laserliner tester napetosti AC tive Finder Kataloška št.: 12 3
SLO NAVODILA ZA UPORABO IN MONTAŽO Kat. št.: 12 33 32 www.conrad.si NAVODILA ZA UPORABO Laserliner tester napetosti AC tive Finder Kataloška št.: 12 33 32 KAZALO 1. FUNKCIJE / UPORABA... 3 2. VARNOSTNI
Prikaži večMicrosoft Word - CNC obdelava kazalo vsebine.doc
ŠOLSKI CENTER NOVO MESTO VIŠJA STROKOVNA ŠOLA STROJNIŠTVO DIPLOMSKA NALOGA Novo mesto, april 2008 Ime in priimek študenta ŠOLSKI CENTER NOVO MESTO VIŠJA STROKOVNA ŠOLA STROJNIŠTVO DIPLOMSKA NALOGA Novo
Prikaži večMicrosoft Word doc
SLO - NAVODILO ZA NAMESTITEV IN UPORABO Št. izd. : 122383 www.conrad.si ROČNI OSCILOSKOP VELLEMAN HPS140 Št. izdelka: 122383 1 KAZALO 1 MED UPORABO... 3 2 LASTNOSTI IN TEHNIČNI PODATKI... 3 3 OPIS SPREDNJE
Prikaži večRAZMERJE MED HITROSTJO DIFUZIJE in VELIKOSTJO CELICE
RAZMERJE MED HITROSTJO DIFUZIJE in VELIKOSTJO CELICE UVOD Celica, kateri smo se posvetili pri laboratorijskem delu, je osnovna gradbena enota vsakega živega bitja ali pa že ena sama predstavlja organizem
Prikaži večSLOVENIJA
KONDENZATORJI VRSTE in UPORABA Anja Pomeni besed: Kondenzator je naprava za shranjevanje električnega naboja Kapaciteta kondenzatorja pove, koliko naboja lahko hrani pri napetosti enega volta. Kapaciteta
Prikaži večSistemi Daljinskega Vodenja Vaja 3 Matej Kristan Laboratorij za Strojni Vid Fakulteta za elektrotehniko, Univerza v Ljubl
Sistemi Daljinskega Vodenja Vaja 3 Matej Kristan Laboratorij za Strojni Vid Fakulteta za elektrotehniko, Univerza v Ljubljani matej.kristan@fe.uni-lj.si Česa smo se naučili
Prikaži večUradni list RS - 094/2014, Uredbeni del
Digitally signed by Petra Skodlar DN: c=si, o=state-institutions, ou=web-certificates, ou=government, cn=petra Skodlar, serialnumber=1236780514024 Reason: Odgovorna urednica Uradnega lista Republike Slovenije
Prikaži večMERE SREDNJE VREDNOSTI
OPIS PODATKOV ENE SPREMENLJIVKE frekvenčne porazdelitve in mere srednje vrednosti as. dr. Nino RODE Uni-Lj. Fakulteta za socialno delo O ČEM BOMO GOVORILI NAMEN OPISNE STATISTIKE Kako opisati podatke OPIS
Prikaži večPasma:
Biotehniška fakulteta Oddelek za zootehniko Groblje 3 SI-1230 DOMŽALE Ministrstvo za kmetijstvo gozdarstvo in prehrano Dunajska 22 SI-1000 LJUBLJANA Rodica, 30.1.2019 Spremljanje izvajanja potrjenega rejskega
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - Standardi znanja in kriteriji ocenjevanja 2 r.ppt [Samo za branje] [Združljivostni način]
STANDARDI ZNANJA PO PREDMETIH IN KRITERIJI OCENJEVANJA 2. razred SLOVENŠČINA 1 KRITERIJI OCENJEVANJA PRI SLOVENŠČINI POSLUŠANJE -Poslušanje umetnostnega besedilo, določanja dogajalnega prostora in časa,
Prikaži večPorocilo I-1-2-5
PROGRAM DELA INŠTITUTA ZA VODE REPUBLIKE SLOVENIJE ZA LETO 2007 Poročilo o delu za leto 2007 PROGRAMSKI SKLOP: NAČRT UPRAVLJANJA VODA NA VODNEM OBMOČJU DONAVE IN VODNEM OBMOČJU JADRANSKEGA MORJA PROJEKT:
Prikaži večDN080038_plonk plus fizika SS.indd
razlage I formule I rešeni primeri I namigi I opozorila I tabele Srednješolski Plonk+ Fizika razlage formule rešeni primeri namigi opozorila tabele Avtor: Vasja Kožuh Strokovni pregled: dr. Gorazd Planinšič
Prikaži več4. tema pri predmetu Računalniška orodja v fiziki Ljubljana, Grafi II Jure Senčar
4. tema pri predmetu Računalniška orodja v fiziki Ljubljana, 6.4.29 Grafi II Jure Senčar Relativna sila krčenja - F/Fmax [%]. Naloga Nalogo sem delal v Excelu. Ta ima vgrajeno funkcijo, ki nam vrne logaritemsko
Prikaži večMicrosoft Word - M docx
Državni izpitni center *M77* SPOMLADANSK ZPTN OK NAVODLA ZA OCENJEVANJE Petek, 7. junij 0 SPLOŠNA MATA C 0 M-77-- ZPTNA POLA ' ' QQ QQ ' ' Q QQ Q 0 5 0 5 C Zapisan izraz za naboj... točka zračunan naboj...
Prikaži večPREVENTIVA in PRESEJANJE - Mateja Bulc
PREVENTIVA in PRESEJANJE v RADM MATEJA BULC Vrste preventive Priložnost ali breme? Benefits Mortality 2018 Men die younger, but life expectancy is rising quicker men: death at 74 (average) +10 y in 30
Prikaži večMicrosoft Word - rogelj-rosus06_4.doc
Zbornik prispevkov strokovne konference ROSUS 2006 Računalniška obdelava slik in njena uporaba v Sloveniji 2006, Maribor, 23. marec 2006. PORAVNAVA MEDICINSKIH SLIK Peter Rogelj, Stanislav Kovačič Univerza
Prikaži večKovačič I: Primerjava dveh metod za dokazovanje adenovirusnih okužb dihal pri otrocih
UNIVERZA V LJUBLJANI FAKULTETA ZA FARMACIJO IVA KOVAČIČ PRIMERJAVA DVEH METOD ZA DOKAZOVANJE ADENOVIRUSNIH OKUŽB DIHAL PRI OTROCIH MAGISTRSKI ŠTUDIJ LABORATORIJSKE BIOMEDICINE Ljubljana, 2017 UNIVERSITY
Prikaži večseminarska_naloga_za_ev
Univerza v Ljubljani Fakulteta za elektrotehniko Matevž Seliger 8-kanalni Lightshow Seminarska naloga pri predmetu: V Horjulu, junij 2008 Kazalo: 1 Uvod... 3 1.1 Namen in uporaba izdelka... 3 2 Delovanje...
Prikaži večDiapozitiv 1
Vhodno izhodne naprave Laboratorijska vaja 4 - AV 4 Linije LTSpice, simulacija elektronskih vezij VIN - LV 1 Rozman,Škraba, FRI LTSpice LTSpice: http://www.linear.com/designtools/software/ https://www.analog.com/en/design-center/design-tools-andcalculators/ltspice-simulator.html
Prikaži večMicrosoft Word - P101-A doc
Š i f r a k a n d i d a t a : Državni izpitni center *P101A22112* SPOMLADANSKI IZPITNI ROK ANGLEŠČINA Izpitna pola 2 Pisno sporočanje A) Krajši pisni sestavek B) Vodeni spis Sobota, 29. maj 2010 / 60 minut
Prikaži večPoskusi s kondenzatorji
Poskusi s kondenzatorji Samo Lasič, Fakulteta za Matematiko in Fiziko, Oddelek za fiziko, Ljubljana Povzetek Opisani so nekateri poskusi s kondenzatorji, ki smo jih izvedli z merilnim vmesnikom LabPro.
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - 14 IntrerspecifiOna razmerja .ppt
IV. POPULACIJSKA EKOLOGIJA 14. Interspecifična razmerja Št.l.: 2006/2007 1 1. INTERSPECIFIČNA RAZMERJA Osebki ene vrste so v odnosih z osebki drugih vrst, pri čemer so lahko ti odnosi: nevtralni (0), pozitivni
Prikaži večMicrosoft Word - SevnoIII.doc
Naše okolje, april 8 METEOROLOŠKA POSTAJA SEVNO Meteorological station Sevno Mateja Nadbath V Sevnem je klimatološka meteorološka postaja Agencije RS za okolje. Sevno leži na prisojnem pobočju Sevniškega
Prikaži večCENE STORITEV OBČINSKIH GOSPODARSKIH JAVNIH SLUŽB IN SUBVENCIONIRANJE CEN STORITEV OBVEZNIH OBČINSKIH GOSPODARSKIH JAVNIH SLUŽB VARSTVA OKOLJA NA OBMO
CENE STORITEV OBČINSKIH GOSPODARSKIH JAVNIH SLUŽB IN SUBVENCIONIRANJE CEN STORITEV OBVEZNIH OBČINSKIH GOSPODARSKIH JAVNIH SLUŽB VARSTVA OKOLJA NA OBMOČJU OBČINE HRASTNIK V LETU 2018 z veljavnostjo 1. 1.
Prikaži večLetni semester ŠTUDIJSKO LETO 2018/2019 POLETNI SEMESTER PREDAVALNICA B1 4. BLOK Ponedeljek Torek Sreda Četrtek Petek REZERVACIJA FIZIOLOGIJA
PREDAVALNICA B 4. BLOK REZERVACIJA ORGANSKA KEMIJA 9 9 REGVAR DOLENC KOCE POŽGAN 0 EVOLUCIJA ETOLOGIJA 0 TRONTELJ 2 2 ETOLOGIJA 3 >SV 2h< 3 BOŽIČ GABERŠČIK, TOMAN, KOS >P h< BOŽIČ 5 GABERŠČIK, GEOMIKROB
Prikaži večKratka navodila za uporabo razširjevalnika dosega WiFi AC750 model EX3800
Hiter začetek Razširjevalnik dosega WiFi AC750 Model EX3800 Začetek uporabe Razširjevalnik dosega WiFi NETGEAR doseg omrežja WiFi poveča tako, da okrepi obstoječi signal WiFi in izboljša splošno kakovost
Prikaži večMicrosoft Word - SI_Common Communication_kor.doc
Splošno sporočilo o izvršitvi sodbe v zadevi IP Translator 2. maj 2013 Sodišče je 19. junija 2012 izreklo sodbo v zadevi C-307/10»IP Translator«in tako odgovorilo na predložena vprašanja: 1. Direktivo
Prikaži večEVROPSKA KOMISIJA Bruselj, C(2018) 7942 final UREDBA KOMISIJE (EU) / z dne o spremembi prilog I, III, VI, VII, VIII, IX, X, XI in
EVROPSKA KOMISIJA Bruselj, 3.12.2018 C(2018) 7942 final UREDBA KOMISIJE (EU) / z dne 3.12.2018 o spremembi prilog I, III, VI, VII, VIII, IX, X, XI in XII k Uredbi (ES) št. 1907/2006 Evropskega parlamenta
Prikaži večMladi za napredek Maribora srečanje DOLŽINA»SPIRALE«Matematika Raziskovalna naloga Februar 2015
Mladi za napredek Maribora 015 3. srečanje DOLŽINA»SPIRALE«Matematika Raziskovalna naloga Februar 015 Kazalo 1. Povzetek...3. Uvod...4 3. Spirala 1...5 4. Spirala...6 5. Spirala 3...8 6. Pitagorejsko drevo...10
Prikaži večPravila za čezmejne pošiljke odpadkov s poudarkom na odpadkih, ki vsebujejo GFRP; izkušnje IRSOP iz izvajanja nadzora nad čezmejnim pošiljanjem odpadk
Pravila za čezmejne pošiljke odpadkov s poudarkom na odpadkih, ki vsebujejo GFRP; izkušnje IRSOP iz izvajanja nadzora nad čezmejnim pošiljanjem odpadkov Delavnica: Kako ravnati z odpadki iz polimernih
Prikaži večPoročilo o izvedeni nalogi, ver.1.4
Poročilo o izvedeni nalogi Evidenčna oznaka: 2163-00/18228-18/37195 Naročnik: JKP ŠENTJUR, JAVNO KOMUNALNO PODJETJE, D.O.O. CESTA LEONA DOBROTINŠKA 18 Izvajalci: Oddelek za okolje in zdravje Celje Oddelek
Prikaži večNo Slide Title
Glavne napake-pomoč KRONOS 1 Diagnostika in dostop do sistema PEČICA NAPAKA NAPAKA PRIKAZANA Z KODO NAPAKE NAPAKA BREZ INDIKACIJE KODE NAPAKE 2 Diagnostika in dostop do sistema Prikaz kode napake Informacije
Prikaži večSlike, specifikacije in cene se lahko razlikujejo od prvih podatkov. Za napake ne odgovarjamo, točnost podatkov preverite na Stro
Slike, specifikacije in cene se lahko razlikujejo od prvih podatkov. Za napake ne odgovarjamo, točnost podatkov preverite na www.vinskevitrine.si Strokovnjaki za hlajenje vina S pravo temperaturo do popolnega
Prikaži večAJPES Agencija Republike Slovenije za javnopravne evidence in storitve INFORMACIJA O POSLOVANJU SAMOSTOJNIH PODJETNIKOV POSAMEZNIKOV V NOTRANJSKO-KRAŠ
AJPES Agencija Republike Slovenije za javnopravne evidence in storitve INFORMACIJA O POSLOVANJU SAMOSTOJNIH PODJETNIKOV POSAMEZNIKOV V NOTRANJSKO-KRAŠKI REGIJI V LETU 2010 Postojna, maj 2011 KAZALO I.
Prikaži večVečna pot 2, SI-1000 Ljubljana VABILO Otrokov svet je svež, nov in lep, poln vznemirjenj, čudenja in presenečenj in prav tak je slovenski gozd! Gozdar
VABILO Otrokov svet je svež, nov in lep, poln vznemirjenj, čudenja in presenečenj in prav tak je slovenski gozd! je v zadnjih letih pridobil številne izkušnje in znanja za podporo privlačnejšemu vzgojnoizobraževalnemu
Prikaži večBDV-N890W/BDV-N790W
Sistem za domači kino s predvajalnikom Blu-ray Disc /DVD BDV-N890W BDV-N790W SI Začnite tukaj Kratka navodila za postavitev in uporabo BDV-N790W BDV-N890W 1 Vsebina embalaže/nastavitev zvočnikov BDV-N890W
Prikaži večMicrosoft Word doc
SLO - NAVODILO ZA MONTAŽO IN UPORABO : št. art. : 90 79 14 www.conrad.si Zvočniki Hercules XPS 2,1 20 Gloss Št. izdelka: 90 79 14 Navodila za uporabo so sestavni del izdelka. Vsebujejo pomembne napotke
Prikaži večFizikalne osnove svetlobe
Fizikalne osnove svetlobe Svetloba Svetloba - skrivnostna in fascinantna spremljevalka človekove zgodovine Kako deluje vid? Svetloba in vid Dva pojma, ki sta danes neločljivo povezana. Vendar ni bilo vedno
Prikaži več