MED RAZGL 2002; 41: 3 12 RAZISKOVALNI ^LANEK Senta Frol 1, Martin Hren 2 Izbira primernih monoklonskih protiteles in optimizacija imunohistokemijske m
|
|
- Simona Kuhar
- pred 4 leti
- Pregledov:
Transkripcija
1 MED RAZGL 2002; 41: 3 12 RAZISKOVALNI ^LANEK Senta Frol 1, Martin Hren 2 Izbira primernih monoklonskih protiteles in optimizacija imunohistokemijske metode za dokazovanje patolo{kega prionskega proteina v mo`ganih bolnikov s sporadi~no obliko Creutzfeldt-Jakobove bolezni 3 Selection of Suitable Monoclonal Antibodies and Optimization of the Immunohistochemical Method for the Detection of Pathological Prion Protein in the Brains of Patients with Sporadic Creutzfeldt-Jakob Disease IZVLE^EK KLJU^NE BESEDE: Creutzfeldt-Jakobova bolezen diagnostika, prioni analiza, protitelesa monoklonska Diagnostika prionskih bolezni temelji na imunohistokemijskem dolo~anju ob uporabi protiteles proti prionskemu proteinu (PrP), ki ne razlikujejo med celi~no obliko PrP (PrP C ) in patolo{ko izoobliko (PrP Sc ). Zato zahteva ta metoda mo~ne predobdelave za odstranjevanje PrP C in razkrivanje epitopa na PrP Sc v parafinskih rezinah umrlih za prionsko boleznijo. Namen na{e naloge je bil testirati monoklonska protitelesa proti PrP Sc (MPt) V5B2, K4B3, A4/5 in E5/9, ki so jih pripravili na Zavodu RS za transfuzijo krvi, jih primerjati s kontrolnimi, komercialno dostopnimi MPt 3F4 in 6H4, ter poiskati enostavnej{o predobdelavo za razkrivanje epitopa na PrP Sc. Parafinske histolo{ke rezine vzorcev mo`gan {tirih umrlih za sporadi~no Creutzfeldt-Jakobovo boleznijo (scjb) in dveh umrlih primerljive starosti, ki nista imela CJB, smo obdelali s prilagojeno standardno imunohistokemijsko metodo avidin-biotin kompleks (ABC) ob uporabi na{ih MPt, kontrolnih MPt in {tirih predobdelav. Imunohistokemijsko reakcijo (IHR) z na{imi MPt in PrP Sc smo primerjali z IHR med kontrolnima MPt (3F4 in 6H4) in PrP Sc z ozirom na jakost signala IHR in {tevilo pozitivnih reakcij. Ista MPt smo uporabili tudi na zaledenelih rezinah vzorcev dveh ne-cjb-mo`gan brez kakr{nekoli predobdelave. V nalogi smo pokazali, da so vsa {tiri testirana MPt specifi~na za PrP Sc, saj za razliko od dveh kontrolnih MPt niso prikazala PrP C v zaledenelih rezinah sve`ih ne-cjb-mo`gan. Prav tako smo pokazali, da se z mo~nej{imi predobdelavami histolo{kih rezin IHR izbolj{a, tako v jakosti kot tudi v {tevilu pozitivnih reakcij (p < 0,05). Na{e MPt V5B2 je ob~utljivej{e od kontrolnega MPt 3F4 (p = 0,03) in je zmo`no z manj intenzivno predobdelavo zanesljivo ozna~iti PrP Sc v mo`ganih obolelih za CJB. Z omenjenimi rezultati smo dokazali specifi~nost vseh na{ih MPt za PrP Sc. Pokazali smo, da se ta MPt med seboj razlikujejo po ob~utljivosti in da je za diagnostiko scjb najbolj primerno MPt V5B2, primernej{e tudi od dveh kontrolnih MPt. Domnevamo, da je MPt V5B2 primerno za izdelavo testov za dokazovanje PrP Sc v zaledenelih rezinah potencialno oku`enih tkiv ali pa v telesnih teko~inah. 3 1 Senta Frol, {tud. med., In{titut za patologijo, Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani, Korytkova 2, 1000 Ljubljana. 2 Martin Hren, {tud. med., In{titut za patologijo, Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani, Korytkova 2, 1000 Ljubljana. 3 Delo je bilo nagrajeno s Pre{ernovim priznanjem za {tudente za leto 2001.
2 S. FROL, M. HREN IZBIRA PRIMERNIH MONOKLONSKIH PROTITELES MED RAZGL 2002; 41 ABSTRACT KEY WORDS: Creutzfeldt-Jakob syndrome diagnosis, prions analysis, antibodies monoclonal 4 Reliable diagnosis of prion diseases is based on a positive immunohistochemical reaction (IHR) using antibodies against prion protein (PrP). Unfortunately, this does not distinguish between cellular PrP (PrP C ) and the pathological isoform (PrP Sc ). Consequently, this method requires intensive pre-treatments to remove PrP C and retrieve the epitope of PrP Sc in paraffin sections of the brains of patients with prion disease. The aim of this study was to test anti-prp monoclonal antibodies (MAb) V5B2, K4B3, A4/5 and E5/9, which were prepared at the Blood Transfusion Center of Slovenia, in order to compare them with commercially available MAb 3F4 and 6H4, and to design a simple antigen retrieval method to label PrP Sc in immunohistochemistry. Sections of paraffin-embedded brain tissue for four cases of sporadic Creutzfeldt-Jakob disease (scjd) and of two deceased patients of similar age who had not had CJD were treated with a modified standard ABC immunohistochemical method using our MAb, control MAb and four pre-treatments. The IHR of our MAb was compared with the IHR of the control MAb (3F4 and 6H4) with regard to the intensity of IHR and the number of positive reactions. The same MAb were tested on the frozen sections of two brains not affected by CJD without any pre-treatment. The results showed that all four tested MAbs were specific for PrP Sc since, unlike the two control MAbs, they did not react with PrP C in the frozen sections of non-cjd brain. An improvement in IHR at more intense section pre-treatments of tissues was also demonstrated in terms of intensity and the number of positive reactions (p < 0.05). Our MAb V5B2 is more sensitive than the control MAb 3F4 (p = 0.03). It does not need an equally intense pre-treatment as MAb 3F4 to label PrP Sc in CJD-affected brain. The obtained results confirmed the hypothesis on the specificity of our MAb for PrP Sc. Furthermore, we found that MAbs differ in terms of sensitivity and that MAb V5B2 is best suited for the diagnosis of CJD, even more so than the two control MAbs. MAb V5B2 is assumed to be suitable for the development of tests capable of detecting native PrP Sc in frozen sections of potentially infected tissues, or in the bodily fluids of patients with prion diseases. UVOD Prion Danes velja, da prionske bolezni povzro~ajo prioni. Prion je po hipotezi Stanleyja B. Prusinerja definiran kot beljakovinski ku`ni delec, brez nukleinske kisline (1, 2). Sama zamisel je v za~etku povzro~ila mnogo dvomov nekateri so mrzli~no iskali sledove kakr{nekoli nukleinske kisline, da bi dokazali obstoj neke vrste po~asnega virusa. Dandanes je eksperimentalnih dokazov preprosto preve~, da bi se jim dalo oporekati, poglavje o prionskih boleznih pa nas je s svojo svojstvenostjo nau~ilo tudi strpnosti do idej, ki se v za~etku zdijo nesprejemljive. Prusiner je leta 1997 za prionsko hipotezo prejel Nobelovo nagrado za medicino (1 3). Prion (PrP Sc ) je patolo{ka izoforma prionskega glikoproteina, ki je v svoji fiziolo{ki obliki normalno prisoten na celi~ni membrani razli~nih celic, vendar je najmo~neje izra`en v mo`ganih. S poskusi na mi{kah je dokazano, da je njegova prisotnost nujno potrebna za razvoj prionskih bolezni (2). PrP C in PrP Sc se ne razlikujeta v aminokislinskem zaporedju, razlikujeta pa se po svoji terciarni strukturi. Pribli`no 40 % molekule PrP C ima obliko α-vija~nice, zelo majhen del je v obliki β-nagubanega lista, medtem ko je v PrP Sc le pribli`no 30 % molekule v obliki α-vija~nice in kar 45 % v obliki β-nagubanega lista (2).
3 MED RAZGL 2002; 41 Ku`nost prionov je neuni~ljiva z obi~ajnimi metodami, ki sicer uni~ijo vse ostale povzro~itelje ku`nih bolezni (formalin, X-`arki, UV-`arki, obi~ajno avtoklaviranje, nukleaze) (4). Njihova odpornost je tudi razlog za nastanek iatrogenih oblik prionskih bolezni, kjer prihaja do prenosa prionov z obi~ajno steriliziranimi kirur{kimi instrumenti in stereotakti~nimi elektrodami ter s kadavrskimi tkivi. Prionske bolezni Prionske bolezni so edinstvene zaradi njihove pojavnosti v razli~nih oblikah, tako patogenetskih kot tudi klini~nih in histopatolo{kih. To so namre~ edine, do tega trenutka znane bolezni, ki se pojavljajo v sporadi~ni, dedni in ku`ni obliki, vsaka s svojimi posebnostmi, vendar z enakim etiolo{kim dejavnikom. Prav tako so dedne prionske bolezni edine dedne bolezni, ki so lahko prenosne oz. ku`ne. Prionske bolezni, ki so jih opisali pri ljudeh: Creutzfeldt-Jakobova bolezen (CJB), usodna dru`inska nespe~nost (FFI fatalna familiarna insomnia), Gerstmann-Sträussler-Scheinkerjev sindrom (GSS), kuru (4, 5), nova razli~ica CJB (vcjb) (6). Pri `ivalih so najbolj prou~ene prionske bolezni: praskavec, BSE (1, 4) itn. [tevilni posredni dokazi ka`ejo, da naj bi pri{lo do prenosa govejih prionov na ~loveka (6 9). Diagnostika prionskih bolezni pomen imunohistokemije Zaradi narave prionskih bolezni in njihovega povzro~itelja je njihova natan~na diagnostika tako pri ~loveku kot tudi pri `ivalih neizmernega pomena. Najpomembnej{e je namre~ prepre~evanje prenosa prionov s ~loveka na ~loveka (mo`nost iatrogene oblike CJB) in z goveda na ~loveka (vcjb). Dodaten problem pri prepre~evanju prenosa je dolga inkubacijska doba teh bolezni, v kateri je mo`en prenos bolezni, preden se pojavijo klini~ni znaki. Patohistolo{ke spremembe v mo`ganih so nespecifi~ne, torej na podlagi le-teh ni mo`na zanesljiva diagnoza prionskih bolezni (10). Zadnje desetletje je metoda izbire za potrditev klini~ne diagnoze prionskih bolezni imunohistokemija, to je prepoznavanje antigenov v tkivnih rezinah s pomo~jo specifi~nih protiteles. Metoda se uporablja na histolo{kih rezinah vzorcev mo`gan umrlih za prionskimi boleznimi in je visoko specifi~na (10 12). Pri imunohistokemijski metodi pa se sre- ~ujemo predvsem z dvema te`avama. Prva je zakritje epitopov na molekuli priona po fiksaciji mo`gan v formalinu (13). Zato je treba razkriti vezno mesto za protitelo, kar je klasi~ni korak pri imunohistokemijski obdelavi kateregakoli tkiva, ki je bilo dlje ~asa fiksirano. Druga te`ava je dejstvo, da do dana{njega dne {e niso opisali protitelesa, ki bi bilo specifi~no za PrP Sc in ne bi hkrati ozna~ilo tudi v mo`ganih prisotnega PrP C. Da bi ob{li obe te`avi, so raziskovalci preizku{ali razne na~ine predobdelave tkiva (10, 12 14). Pri tem so izkoristili odpornost prionov na delovanje proteoliznih encimov, s katerimi so najprej uni~ili PrP C, da so nato lahko prikazali samo preostali PrP Sc tudi z nespecifi~nimi protitelesi. Multicentri~na {tudija, ki je bila opravljena leta 1997 v Veliki Britaniji, narekuje uporabo avtoklaviranja (10 minut pri 121 C), mravlji~ne kisline (5 minut, 96 % HCOOH) in 4M-gvanidijevega tiocianata (2uri pri 4 C) kot najbolj{o kombinacijo predobdelav, ki re{i obe te`avi, s katerimi se sre~ujemo pri dokazovanju prionov z imunohistokemijsko metodo (14). S protitelesi, specifi~nimi za PrP Sc, bi se izognili zamudnim in zahtevnim predobdelavam, ki ve~krat uni~ijo histolo{ko rezino. Tak{na protitelesa bi lahko uporabili tudi za razvoj metod, ki bi predstavljale hitrej{o, enostavnej{o in zato tudi cenej{o diagnostiko BSE v klavnicah. NAMEN RAZISKAVE Na Zavodu RS za transfuzijo krvi v Ljubljani so z imunizacijo mi{i BALB/c s 13-aminokislinskim peptidom, izbranim iz primarne strukture humanega PrP, ki je bil vezan na nosilno molekulo, dobili izredno dober imunski odziv. Izolirali so paleto MPt-s (15 17), ki so jih nato testirali tudi s pomo~jo IHR na parafinskih histolo{kih rezinah vzorcev mo`gan dvanajstih bolnikov, ki so v Sloveniji umrli zaradi sporadi~ne obilke CJB (scjb) v obdobju od leta 1988 do leta 2001, in na 5
4 S. FROL, M. HREN IZBIRA PRIMERNIH MONOKLONSKIH PROTITELES MED RAZGL 2002; 41 6 enakem {tevilu ne-cjb-mo`ganov primerljive starosti. [tiri MPt-a z oznakami V5B2, K4B3, A3/4 in E9/5, ki so ozna~ila le PrP Sc v CJB-mo`ganih in nobene strukture v ne-cjbmo`ganih, smo izbrali z namenom, da doka`emo njihovo specifi~nost za PrP Sc z imunohistokemijsko metodo ter da standardiziramo enostavno imunohistokemijsko metodo za dokazovanje prionov s temi MPt. Ta metoda bo omogo~ila zanesljivo diagnostiko prionskih bolezni. MATERIAL IN METODE Imunohistokemijska reakcija na parafinskih rezinah scjbin ne-cjb-mo`gan Izbrana MPt-a smo testirali in standardizirali na parafinskih rezinah vzorcev velikih in malih mo`gan {tirih bolnikov, ki so umrli za scjb. Za kontrolo smo uporabili vzorce mo`gan dveh umrlih primerljive starosti, ki niso vsebovali prionov. IHR na{ih MPt-s smo primerjali z dvema komercialno dostopnima MPt, 3F4 (Senetek, ZDA) in 6H4 (Prionics, [vica), ki ne razlikujeta med PrP C in PrP Sc. Po {tirinajstdnevni fiksaciji v 10 % formalinu smo po en vzorec iz malih in velikih mo`ganov eno uro razku`evali v 96 % mravlji~ni kislini (18). Na ta na~in smo prepre~ili vnos prionov v laboratorij in morebitno oku`bo tehni~nih delavcev. Po tridesetminutnem izpiranju v teko~i vodi smo vzorce dehidrirali v nara{~ajo~ih koncentracijah etanola (70%, 95 % in 100 %) in ksilolu ter jih vklopili v parafin. Z mikrotomom smo odrezali 10µ debele histolo{ke rezine in jih postavili na adhezivna predmetna stekelca firme Menzel. Sledilo je su{enje histolo{kih rezin v termostatu na 59 C ~ez no~. Ohlajene rezine smo deparafinirali v treh izmenjavah ksilola po 5 minut, nato smo jih rehidrirali po 3 minute v padajo~ih koncentracijah etanola (100 %, 95 % in 70 %) in sprali v destilirani vodi. Pred uporabo primarnih protiteles smo histolo{ke rezine razdelili v {tiri skupine in jih obdelali na {tiri na~ine (angl. pre-treatment PT), z namenom razkriti epitope na PrP Sc in uni~iti PrP C (tabela 1). Nadaljnji postopek je potekal avtomati~no v stroju Ventana Nexes firme Ventana iz ZDA, ki uporablja avidin-biotin kompleks imunohistokemijsko metodo. Prvi korak v stroju je 4-minutna blokada endogene peroksidaze s peroksidom, ki je razred~en v pufru. Primarna MPt smo uporabili v obliki supernatanta v koncentraciji 1 2 µg/ml. Komercialni protitelesi, 3F4 in 6H4, smo uporabili v enaki koncentraciji. Inkubacija primarnih MPt na histolo{kih rezinah je trajala 20 minut pri temperaturi 38 C, ki je delovna temperatura za celotno IHR. Nato je sledila inkubacija s komercialnimi biotiniliranimi sekundarnimi kozjimi protitelesi proti mi{jim imunoglobulinom 8 minut. Tako pove~ano molekulo smo ozna- ~ili z avidinom, ki se je vezal na biotin 8 minut. Komercialno pripravljena raztopina peroksidaze se je v osmih minutah vezala na avidin. Mesto vezave primarnega MPt-a smo pokazali s 3,3-diaminobezidinom (DAB), ki se je oboril kot rjavo barvilo. Obarjanje DAB-a je omogo~ila reakcija med peroksidazo, ki je vezana na avidin, in peroksidom, ki ga je stroj nakapal na histolo{ko rezino neposredno pred DAB. Stroj je med posameznimi fazami dela histolo{ke rezine mo~no izpiral s pufri, tako da so bila vsa protitelesa, ki se niso vezala, odstranjena. Vsi reagenti, razen protiteles proti PrP, ki so vklju~eni v sistem avtomati~ne IHR, so izdelki firme Ventana. Njihova natan~na sestava nam ni znana. Za kontrolo samega postopka IHR smo pri seriji rezin iz vseh testiranih vzorcev mo`gan izpustili primarno MPt. Tabela 1. Tkivne predobdelave, ki smo jih uporabili na parafinskih rezinah malih in velikih mo`gan bolnikov s sporadi~no CJB. PT I brez kakr{nekoli predobdelave PT II 5 minut v 96 % mravlji~ni kislini PT III 10 minut v mikrovalovni pe~ici v EDTA-pufru (temperatura 97 C, ph = 8), sledi 15 minut hlajenja na sobni temperaturi, zatem {e 5 minut v 96 % mravlji~ni kislini na sobni temperaturi PT IV 30 minut avtoklaviranja v malem avtoklavu v citratnem pufru ph = 7,3 na temperaturi 121 C, zatem hlajenje 5 minut v hladni destilirani vodi, potem {e 5 minut v 96 % mravlji~ni kislini
5 MED RAZGL 2002; 41 Zaradi la`jega ocenjevanja lokalizacije IHR smo jedra v histolo{kih rezinah kontrastirali 4 minute z Mayerjevim hematoksilinom. Nato smo histolo{ke rezine pokrili s krovnimi stekelci v stroju RCM (angl. robot coverslipping machine) 2000 tovarne Medite-Meisai, Japonska. Imunohistokemijska reakcija v zaledenelih rezinah ne-cjb-mo`gan Na zaledenelih rezinah malih mo`ganov dveh umrlih, ki nista imela CJB, smo izvedli imunohistokemijsko reakcijo z istimi MPt-i (V5B2, K4B3, A3/4, E9/5, 3F4 in 6H4) brez uporabe kakr{nekoli predobdelave. Sve`e vzorce malih mo`gan smo postavili na kovinske podlo`ke, pokrite s krioprotektivnim medijem, ki {~iti tkivo pred po{kodbo pri zmrzovanju. Pet minut smo jih zamrzovali v kriostatu na temperaturi 25 C. Nato smo, prav tako v kriostatu, rezali 10 µ debele rezine, jih postavili na predmetna stekelca, ki so tovarni{ko prevle~ena z adhezivno snovjo. Po su{enju na zraku eno uro smo jih inkubirali v normalnem konjskem serumu. Sledila je inkubacija s primarnimi MPt v koncentraciji 1 2 µg/ml, dve uri na sobni temperaturi. Biotinilirano konjsko sekundarno protitelo proti mi{jim imunoglobulinom (Vector Laboratories, ZDA) smo razred~ili 1 : 1500 in ga nanesli na histolo{ke rezine za 90 minut, nato je sledilo 60 minut inkubacije histolo{kih rezin z avidin-biotin-peroksidaznim kompleksom (ABC Elite Standard Kit, Vector Laboratories, ZDA). IHR smo vizualizirali z DAB v prisotnosti H 2 O 2. Po ve~kratnem izpiranju smo kontrastirali jedra z Mayerjevim hematoksilinom. Histolo{ke rezine smo trajno pokrili z DePeX (Chema, Nem~ija) in krovnimi stekelci. REZULTATI IHR med anti-prpsc MPt in PrPsc na parafinskih histolo{kih rezinah vzorcev iz {tirih CJBin dveh ne-cjb-mo`gan Nobeno od na{ih MPt-s ni reagiralo s PrP C, ne glede na predobdelavo. Tudi komercialni MP, 3F4 in 6H4, nista kazali imunoreaktivnosti s PrP C pod enakimi pogoji. Imunoreaktivnost vseh MPt s PrP Sc je nara{~ala od PT I do PT IV. Jakost IHR pri MPt V5B2 in K4B3 je mo~nej{a `e pri {ibkej{ih PT (PT I in II) v primerjavi z MPt A3/4, E9/5, 3F4 in 6H4. MPt V5B2 in K4B3 sta najmo~neje ozna~ila PrP Sc ob uporabi PT III, kar je zadosten signal za diagnozo CJB. Komercialno MPt 3F4, ki sicer ni ozna~ilo PrP Sc ob uporabi dveh {ibkej{ih PT I in II in je ob uporabi PT III ozna~ilo le `ari{~no PrP Sc, je ob uporabi najmo~nej{ega PT IV ozna~ilo PrP Sc nekoliko mo~neje kot V5B2 in K4B3 (tabela 2, slika 1). Pomanjkljivost te predobdelave je, da hudo okvari histolo{ke rezine zaradi dalj{ega kuhanja le-teh. Tabela 2. Jakost imunohistokemijske reakcije med posameznimi protitelesi in PrP Sc v histolo{kih preparatih mo`gan 4 bolnikov, umrlih za scjb. Podani so razponi ocen jakosti IHR, ugotovljeni na mo`ganskih rezinah 4 primerov CJB. PrP Sc PT I PT II PT III PT IV V5B K4B A3/ E9/ F H Legenda: 0 brez vidne IHR; 1 blaga IHR; 2 zmerna IHR; 3 mo~na IHR; PT I IV, razli~ne predobdelave rezin (glej tabelo 1). Nobeno MPt ne ozna~i PrP Sc po PT I (a, ~, f). Po PT III V5B2 najbolje ozna~i PrP Sc (b) v primerjavi s 3F4 (d) in 6H4 (g). PT IV najbolj poja~a IHR med V5B2 in PrP Sc (c), nekoliko manj, vendar tudi med 3F4 in PrP Sc (e), medtem ko ta predobdelava ne vpliva bistveno na IHR med 6H4 in PrP Sc (h). PT IV mo~no po{koduje histolo{ke rezine (c, e, h). Merilo na sliki h predstavlja 30 µ za slike a, b, ~, d, f, g, in 60 µ za slike c, e, h. Na histolo{kih rezinah vzorca velikih mo`gan umrlega, ki ni imel klini~nih znakov okvare osrednjega `iv~evja in v katerih mikroskopski pregled ni pokazal nobenih sprememb, ter vzorca velikih mo`gan umrlega, ki je imel Alzheimerjevo bolezen (negativna kontrola), ki smo jih testirali pod enakimi pogoji in z enakimi MPt-i, nismo opazili vzorca IHR, ki bi bil zna~ilen za katerikoli 7
6 S. FROL, M. HREN IZBIRA PRIMERNIH MONOKLONSKIH PROTITELES MED RAZGL 2002; 41 V5B2 3F4 6H4 8 PT I PT III PT IV A B C ^ D E F G H Slika 1. Prikaz jakosti IHR z V5B2, 3F4 in 6H4 po PT I, PT III in PT IV v histolo{kih rezinah malih mo`gan s sinapti~nim vzorcem odlaganja PrP Sc.
7 MED RAZGL 2002; 41 na~in odlaganja PrP Sc, prav tako pa ni bilo nikjer opaziti IHR na PrP C. Kontrola imunohistokemijske metode, ki smo jo opravili na vseh testiranih vzorcih tako, da smo iz postopka izpustili primarno monoklonsko protitelo, je pokazala, da se nobena druga kemikalija v postopku IHR ni vezala na histolo{ke rezine. IHR med anti-prpsc MPt in PrPc na zaledenelih histolo{kih rezinah ne-cjb-mo`gan Nobeno od {tirih MPt, pripravljenih na ZTK, ni v zaledenelih rezinah ne-cjb-mo`gan prikazalo PrP C, medtem ko sta obe komercialni MPt (3F4 in 6H4) ozna~ili PrP C (slika 2). Zaradi prevelikega tveganja za oku`bo nismo opravili pregleda zaledenelih rezin sve`ih CJB- mo`gan. Jakost IHR med 3F4 in PrP C je bila zmerna v nevropilu skorje malih mo`gan in mo~na v Purkinjevih celicah, medtem ko MPt 6H4 ni ozna~ilo PrP C v Purkinjevih celicah, ampak je le blago ozna~ilo PrP C vnevropilu skorje malih mo`gan (slika 2). (a) V5B2 ne ozna~i nobene strukture v zaledeneli rezini skorje malih ne-cjb-mo`gan, kot tudi ne K4B3 (d) in A3/4 (e). Imunoreaktivnost s temi MPt je popolnoma enaka A B 9 C ^ D E Slika 2. Prikaz IHR z V5B2, 3F4 in 6H4 na zaledenelih rezinah ne-cjb mo`gan, v katerih je le PrP C.
8 S. FROL, M. HREN IZBIRA PRIMERNIH MONOKLONSKIH PROTITELES MED RAZGL 2002; imunoreaktivnosti v histolo{ki rezini na sliki b, ko smo iz imunohistokemijske reakcije izpustili primarno protitelo (-K). (c) 3F4 je mo~no reagiral s PrP C v Purkinjevih celicah (pu{~ica) in za spoznanje {ibkeje s PrP C vostalih strukturah skorje malih mo`gan. (~) Reakcija med 6H4 in PrP C v zaledeneli rezini malih mo`gan je le blago pozitivna. To MPt ne ozna~i Purkinjevih celic. Merilo na sliki e predstavlja 120 µ in velja za vse slike. S pomo~jo t-parjenja smo izra~unali t-vrednosti primerjave jakosti IHR pri uporabi MPt V5B2 in 3F4 (tabela 3). Na podlagi teh rezultatov smo lahko podali relativno oceno kvalitete obeh MPt-s pri uporabi v imunohistokemiji. Ugotovili smo, da je MPt V5B2 bolj{e (bolj ob~utljivo) kakor kontrolno MPt 3F4 (p = 0,03). To lahko trdimo s 97 % zanesljivostjo. Tabela 3. Povpre~ne vrednosti IHR (rezultati vseh PT) za MPt 3F4 in MPt V5B2 ter korelacija med obema rezultatoma. SD standardna deviacija; povpre~na jakost IHR od 0 do 3. MPt 3F4 V5B2 Povpre~na jakost IHR 0,8125 1,4375 Napaka SD 0,5896 0,2772 Korelacija med MPt V5B2/3F4 t = 2,24 p = 0,03 1 p = 0,97 RAZPRAVLJANJE Uspe{na in zanesljiva diagnostika prionskih bolezni je najpomembnej{e orodje za prepre- ~evanje njihovega {irjenja. Pri izpopolnjevanju tega orodja so raziskovalci v preteklih letih postavili na prvo mesto imunohistokemijo, ki ima zaradi nespecifi~nih in nestalnih patohistolo{kih sprememb jasne prednosti pred klasi~no histologijo (5, 11). Imunohistokemija je tudi potrdilna diagnosti~na metoda (19, 20). Glavni te`avi, s katerimi se v imunohistokemiji sre~ujemo, sta nespecifi~nost dostopnih protiteles za PrP Sc in zakritje epitopov na molekuli priona zaradi fiksacije tkiva v formalinu (21, 22). Priporo~ene predobdelave mo`ganskega tkiva, s katerimi se izognemo obema te`avama, so dokaj zapletene in zamud- ne ter so zaradi tega neprimerne za rutinsko vsakodnevno diagnostiko. Prav tako so te predobdelave neprimerne za diagnostiko prionov v telesnih teko~inah (23, 24). V telesnih teko- ~inah sicer ni te`av zaradi zakritja epitopa (ni fiksacije v formalinu), vendar problem predstavlja nespecifi~nost MPt, saj je znano, da je PrP C izra`en tudi na eritrocitih, trombocitih, limfocitih in granulocitih (25). S protitelesi, ki bi razlikovala med obema izooblikama PrP oz. bi bila specifi~na za PrP Sc, bi se zapletenost imunohistokemijskih predobdelav na parafinskih rezinah mo`gan umrlih za CJB zmanj{ala, saj bi morali samo {e razkriti epitope na PrP Sc, ne bi pa bilo ve~ treba uni~evati PrP C. Taka protitelesa bi omogo~ila enostavno diagnostiko prionov v sve`em mo`ganskem tkivu (BSE) in v telesnih teko~inah (vcjb) brez strahu pred la`no pozitivnimi rezultati in bi omogo~ila izdelavo hitrih testov, ki bi poenostavili diagnostiko prionskih bolezni (24). Upo{tevajo~ vsa ta dejstva, smo v na{i raziskavi sku{ali dokazati specifi~nost testiranih MPt za PrP Sc tudi z imunohistokemijsko metodo in jo optimirati na tak{en na~in, da bi bila njihova uporaba ~im bolj preprosta, kljub temu pa bi dosegli enako ob~utljivost, kot jo imajo komercialno dostopna protitelesa z zahtevnej{imi in zamudnej{imi predobdelavami (10). Na podlagi dobljenih rezultatov sklepamo, da so vsa na{a MPt specifi~na za PrP Sc, saj niso reagirala s PrP C v njegovi nativni obliki. Treba pa se je zavedati, da imunohistokemija ni visoko ob~utljiva metoda in da zaradi tega {e vedno obstaja mo`nost vezave na{ih MPt na majhno {tevilo molekul PrP C, ki je premajhno za zaznavo z IHR. To je treba ugotoviti z drugimi metodami. Prav tako moramo omeniti, da nismo imeli pogojev, da bi opravili IHR z na{imi MPt-i in nativno ku`nino v zaledenelih rezih CJB-mo`gan. Glede na to, da na podlagi na{ega poskusa menimo, da sta na{i MPt-i V5B2 in K4B3 specifi~ni za PrP Sc in da v parafinskih rezinah zanesljivo prika`eta odlaganje PrP Sc tudi ob uporabi enostavnej{e predobdelave (PT III), ki ne uni~uje histolo{kih rezin, lahko trdimo, da sta primernej{i za uporabo v diagnostiki prionskih bolezni na parafinskih rezinah od komercialnih protiteles.
9 MED RAZGL 2002; 41 ZAKLJU^KI Rezultati raziskovalne naloge potrjujejo hipotezo, da so {tiri MPt (V5B2, K4B3, A3/4 in E9/5), ki so jih pripravili na Zavodu RS za transfuzijo krvi, specifi~na za PrP Sc v primerjavi s komercialnima MPt, 3F4 in 6H4, ki ne razlikujeta med PrP C in PrP Sc. Menimo, da je PT III najprimernej{a predobdelava za diagnostiko prionskih bolezni pri ljudeh na parafinskih histolo{kih rezinah, ker je enostavna, ne po{koduje histolo{kih rezin in omogo~a zanesljivo IHR med MPt V5B2 in PrP Sc v mo`ganih umrlih za CJB. V primeru negativne reakcije ob mo~nem klini~nem sumu na CJB pa predlagamo uporabo PT IV, ki bo z MPt V5B2 ta sum zanesljivo potrdila ali ovrgla. V Sloveniji izdelana MPt bi bila zaradi svoje specifi~nosti idealna za izdelavo hitrih testov, ki bi omogo~ili hitro in zanesljivo dokazovanje prionov v mo`ganih govedi, organov, namenjenih transplantacijam in v tkivnih teko~inah. Treba je {e dokazati, da se ta protitelesa ve`ejo na nativno ku`nino. ZAHVALA Zahvaljujeva se mentoricama, doc. dr. Mari Popovi}, dr.med. in doc. dr. Vladki ^urin - [erbec, dipl. ing. kem., za pomo~ pri izvedbi naloge, voljo pri popravljanju najinega dela in vztrajanju pri delu z nama. Zahvalila bi se rada tudi doc. dr. Mari Bresjanac, dr. med., ki je ro~no izvedla imunohistokemijo na zaledenelih rezinah. Dr. Vesni Galvani in Elviru Mujki~u se zahvaljujemo za pomo~ pri izbiri ustreznih statisti~nih metod in svetovanju pri obdelavi zbranih podatkov. Hvala dr. Ruth Rupreht za pomo~ pri izdelavi slik. Hvala tudi Andreju Bergauerju za njegovo potrpe`ljivost pri urejanju in opremljanju izdelanih slik. LITERATURA 1. Prusiner SB. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science 1982; 216: Prusiner SB. Prions. Proc Natl Acad Sci 1998; 95: Popovi} M. Nobelova nagrada za medicino Stanley B. Prusiner o~e priona. Proteus 1998; 6 (60): Popovi} M. Prionske bolezni pri ~loveku. Med Razgl 1997; 36: Ironside JW. Prion diseases in man. J Pathol 1998; 186: Collinge J, Sidle KCL, Meads J, Ironside JW, Hill AF. Molecular analysis of prion strain variation and the aetiology of»new variant«cjd. Nature 1996; 383: Hill AF, Desbruslais M, Joiner S, Sidle KCL, Gowland I, Collinge J, Doey LJ, Lantos P. The same prion strain causes vcjd and BSE. Nature 1997; 389: Bruce ME, Will RG, Ironside JW, McConnell I, Drummond D, Suttie A, McCardle L, Chree A, Hope J, Birkett C, Cousens S, Fraser H, Bostock CJ. Transmissions to mice indicate that»new variant«cjd is caused by the BSE agent. Nature 1997; 389: Scott MR, Will R, Ironside JW, Nguyen HOB, Tremblay P, DeArmond SJ, Prusiner SB. Compelling transgenetic evidence for transmission of bovine spongiform encephalopathy prions to humans. PNAS 1999; 96 (26): Hayward PAR, Bell JE, Ironside JW. Prion protein immunocytochemistry: reliable protocols for the investigation of Creutzfeldt-Jakob disease. Neuropathology and Applied Neurobiology 1994; 20: Bell JE, Ironside JW. Neuropathology of spongiform encephalopathies in humans. British Medical Bulletin 1993; 49 (4): Kitamoto T, Ogomori K, Tateishi J, Prusiner SB. Methods in laboratory investigation. Formic acid pretreatment enhances immunostaining of cerebral and systemic amyloids. Laboratory Investigation 1987; 57 (2): Everbroeck BV, Pals P, Martin JJ, Cras P. Antigen retrieval in prion protein immunohistochemistry. The Journal of Histochemistry & Cytochemistry 1999; 47 (11): Bell JE, Gentleman SM, Ironside JW, McCardle L, Lantos PL, Doey L, Lowe J, Fergusson J, Luthert P, McQuaid S, Allen IV. Prion protein immunocytochemistry UK five centre consensus report. Neuropathology and Applied Neurobiology 1997; 23: ^urin [erbec V, Hartman Pretnar K, Vranac T, [prohar M, Popovi} M, Volj~ B, Jung M. Site-directed monoclonal antibody specifically recognizes PrP (Sc). Vox Sang 78 (Suppl 1), ^urin [erbec V. Antibodies capable to selectively detect prion PrPSc isoforms. USA 09/576,724; EP (2000). 17. Popovi} M. Prioni in anti-prioni. ISIS 2001;
10 S. FROL, M. HREN IZBIRA PRIMERNIH MONOKLONSKIH PROTITELES MED RAZGL 2002; Herbert Budka, Adriano Aguzzi, Paul Brown, Jean-Marie Brucher, Orso Bugiani, John Collinge, Heino Diringer, et al. Tissue Handling in suspected Creutzfeldt-Jakob disease (CJD) and other human spongiform encephalopaties (prion diseases). Brain Pathol 1995; 5: Kretzschmar HA, Ironside JW, DeArmond SJ, Tateishi J. Diagnostic criteria for sporadic Creutzfeld-Jakob disease. Arch Neurol 1996; 53: Yokoyama T. The immunodetection of the abnormal isoform of prion protein. Histochem J 1999; 31: MacDonald ST, Sutherland K, Ironside JW. A quantitative and qualitative analysis of prion protein immunohistochemical staining in Creutzfeldt-Jakob disease using four anti- prion protein antibodies. Neurodegeneration 1996; 5: Takahashi H, Takahashi RH, Hasegawa H, Horiuchi M, Shinagawa M, Yokoyama T, Kimura K, et al. Characterization of antibodies raised against bovine-prp-peptides. J Neurovirol 1999; 5: Ironside JW, Head MW, Bell JE, McCardle L, Will RG. Laboratory diagnosis of variant Creutzfeldt-Jakob disease. Histopathology 2000; 37 (1): Shaked GM, Shaked Y, Kariva Z, Halimi M, Avraham I, Gabizon R. A protease resistant PrP isoform is present in urine of animals and humans affected with prion diseases. J Biol Chem 2001; 276: Brown P. Transfusion medicine and spongioform encephalopathy. Transfusion 2001; 41: Prispelo
11 MED RAZGL 2002; 41 Obvestilo uredni{tva! V 1. {tevilki 41. letnika revije Medicinski razgledi je v ~lanku avtorjev Sente Frol in Martina Hrena z naslovom Izbira primernih protiteles in optimizacija imunohistokemijske metode za dokazovanje patolo{kega prionskega proteina v mo`ganih bolnikov s sporadi~no obliko Creutzfeldt-Jakobove bolezni `al pri{lo do zamenjave slike 2 na strani 9. Pravilno sliko s pripadajo~im besedilom ponovno objavljamo. Za zamenjavo se avtorjema in bralcem opravi~ujemo. Uredni{tvo Medicinskih razgledov A B C ^ 236 D E Slika 2. Prikaz IHR z V5B2, 3F4 in 6H4 na zaledenelih rezinah ne-cjb mo`gan, v katerih je le PrPC. Slika a V5B2 ne oznaci nobene strukture v zaledeneli rezini skorje malih ne-cjb mo`gan, kot tudi ne K4B3 (slika d) in A3/4 (slika e). Imunoreaktivnost s temi MPt-i je popolnoma enaka imunoreaktivnosti v histolo{ki rezini na sliki b, ko smo iz imunohistokemijske reakcije izpustili primarno protitelo (-K). Slika c 3F4 je mo~no reagiral s PrPC v Purkinjevih celicah (pu{cica) in za spoznanje {ibkeje s PrPC v ostalih strukturah skorje malih mo`gan. Slika c Reakcija med 6H4 in PrPC v zaledeneli rezini malih mo`gan je le blago pozitivna. Merilo na sliki e predstavlja 120 m in velja za vse slike.
60-77.qxd
Tehnolo{ki napredek v naj{ir{em pomenu je pogosto povezan z razli~nimi oblikami nevarnosti in tveganj tako nami{ljenih kot dejanskih. Industrijska, komercialna in doma~a uporaba izdelkov, ki povzro~ajo
Prikaži večMicrosoft Word - P03928SL_D34987 EU IVD IFU NSCLC SK006 _Rev 03.doc
PD-L1 IHC 22C3 pharmdx SK006 50 testov za uporabo z barvalnikom Autostainer Link 48 Predvidena uporaba Za diagnostično uporabo in vitro. PD-L1 IHC 22C3 pharmdx je kvalitativni imunohistokemični test z
Prikaži večPREVENTIVA in PRESEJANJE - Mateja Bulc
PREVENTIVA in PRESEJANJE v RADM MATEJA BULC Vrste preventive Priložnost ali breme? Benefits Mortality 2018 Men die younger, but life expectancy is rising quicker men: death at 74 (average) +10 y in 30
Prikaži večDELOVANJE KATALIZATORJEV Cilji eksperimenta: Opazovanje delovanja encima katalaze, ki pospešuje razkroj vodikovega peroksida, primerjava njenega delov
DELOVANJE KATALIZATORJEV Cilji eksperimenta: Opazovanje delovanja encima katalaze, ki pospešuje razkroj vodikovega peroksida, primerjava njenega delovanja z delovanjem nebeljakovinskih katalizatorjev in
Prikaži večPripravki granulocitov iz polne krvi (buffy coat)
Pripravki granulocitov iz polne krvi (buffy coat) - KLZ Podčetrtek, 8. 1 0. 2 0 16 AV TO R I C A : A n d r e j a H r a š o v e c - L a m p r e t, d r. m e d., s p e c. t r a n s f. m e d. S O AV TO R :
Prikaži večMED RAZGL 2001; 40: RAZISKOVALNI ^LANEK Jerneja Vide~nik 1, Peter Zorman 2 Klini~ne in epidemiolo{ke zna~ilnosti bolnikov z erythema migrans 3
MED RAZGL 2001; 40: 383 400 RAZISKOVALNI ^LANEK Jerneja Vide~nik 1, Peter Zorman 2 Klini~ne in epidemiolo{ke zna~ilnosti bolnikov z erythema migrans 3 Clinical and Epidemiological Characteristics of Patients
Prikaži večVoda za zdravje in ivljenje 1. POGLAVJE ZMOTA SODOBNE MEDICINE Najve~ja tragedija sodobne medicine je po mojem mnenju predpostavka, da naj bi bila suh
1. POGLAVJE ZMOTA SODOBNE MEDICINE Najve~ja tragedija sodobne medicine je po mojem mnenju predpostavka, da naj bi bila suha usta edini znak, da telo potrebuje vodo. Slone~ na tej predpostavki, je sodobna
Prikaži več1_2005_nov.qxd
Dvojni primarni rak jajènikov in dojk: dejavniki tveganja in napovedni dejavniki Mirjam Cvelbar, Marjetka Uršiè-Vršèaj in Stelio Rakar Uvod Rak jaj~nikov je tako v svetu kot v Sloveniji najve~ji problem
Prikaži večENCIMSKO-IMUNSKE METODE ZA TESTIRANJE KRVI PROSTOVOLJNIH KRVODAJALCEV
UNIVERZA V MARIBORU FAKULTETA ZA KEMIJO IN KEMIJSKO TEHNOLOGIJO Irena Iršič ENCIMSKO-IMUNSKE METODE ZA TESTIRANJE KRVI PROSTOVOLJNIH KRVODAJALCEV Diplomska naloga Maribor, december 2008 Stran 2 UNIVERZA
Prikaži večLASTNOSTI BOLNIKOV Z AKUTNIMI LEVKEMIJAMI, ZDRAVLJENIH NA ODDELKU ZA HEMATOLOGIJO UKC MARIBOR V OBDOBJU 2014 – 2015
Jasmina Hauptman, Maja Majal UKC Maribor Laško,7.4. - 9.4.2016 AKUTNE LEVKEMIJE Heterogena skupina klonskih bolezni, ki so posledica pridobljene somatske mutacije in nato nenadzorovane rasti multipotentne
Prikaži večPREVENTIVA in PRESEJANJE - Mateja Bulc
PREVENTIVA in PRESEJANJE v RADM MATEJA BULC Vrste preventive Priložnost ali breme? 2002 Vzrok smrti SKUPAJ Neoplazme Bolezni obtočil Bolezni dihal Bolezni prebavil Poškodbe, zastrupitve Spol - SKUPAJ 18.701
Prikaži več(Microsoft Word - Dr\236avno tekmovanje iz znanja o sladkorni bolezni za SREDNJ\205)
Državno tekmovanje iz znanja o sladkorni bolezni za SREDNJO ŠOLO 22.11.2008 možne toke Osvojene toke 1) Medicinski izraz za»prenizek sladkor v krvi«je: a) diabetes insipidus; 1 b) diabetes melius; c) hiperglikemija;
Prikaži večIMUNOONKOLOGIJA Nov pristop k zdravljenju raka
IMUNOONKOLOGIJA Nov pristop k zdravljenju raka Ne bojte se napredovati počasi, bojte se le tega, da bi se ustavili. Kitajska modrost Imunoonkologija je nov način zdravljenja raka, ki prinaša novo upanje
Prikaži več10. Vaja: Kemijsko ravnotežje I a) Osnove: Poznamo enosmerne in ravnotežne kemijske reakcije. Za slednje lahko pišemo določeno konstanto kemijskega ra
10. Vaja: Kemijsko ravnotežje I a) Osnove: Poznamo enosmerne in ravnotežne kemijske reakcije. Za slednje lahko pišemo določeno konstanto kemijskega ravnotežja (K C ), ki nam podaja konstantno razmerje
Prikaži večzdravljenje s trombocitnimi koncentrati
KO za hematologijo, UKCL zdravljenje s trombocitnimi koncentrati Barbara Skopec poraba KT na KOH 2012 2013 2014 Trombo afereza 2159 2048 1712 trombo zlitje 1551 1822 1781 skupaj 3710 3870 3493 indikacije
Prikaži večPRESENT SIMPLE TENSE The sun gives us light. The sun does not give us light. Does It give us light? Raba: Za splošno znane resnice. I watch TV sometim
PRESENT SIMPLE TENSE The sun gives us light. The sun does not give us light. Does It give us light? Za splošno znane resnice. I watch TV sometimes. I do not watch TV somtimes. Do I watch TV sometimes?
Prikaži večMED RAZGL 2008; 47: 3 12 RAZISKOVALNI ^LANEK Janez Dolen{ek 1 Simulacije dihanja I Simulation of Pulmonary Ventilation I IZVLE^EK KLJU^NE BESEDE: plju
MED RAZGL 2008; 47: 3 12 RAZISKOVALNI ^LANEK Janez Dolen{ek 1 Simulacije dihanja I Simulation of Pulmonary Ventilation I IZVLE^EK KLJU^NE BESEDE: plju~na ventilacija, bronhokonstrikcija, modeli anatomski
Prikaži večNational mozobil expirirence
Zdravljenje z azacitidinom - naše izkušnje Matjaž Sever, dr. med. KO za hematologijo Univerzitetni klinični center Ljubljana Uvod Mielodisplastični sindromi so heterogena skupina klonskih bolezni. Značilna
Prikaži večMED RAZGL 1997; 36: Prou~evanje naravnih gostiteljev virusa klopnega meningoencefalitisa v aktivnih in latentnih `ari{~ih klopnega meningoence
MED RAZGL 1997; 36: 465 478 Prou~evanje naravnih gostiteljev virusa klopnega meningoencefalitisa v aktivnih in latentnih `ari{~ih klopnega meningoencefalitisa v Sloveniji* Examination of tick-borne encephalitis
Prikaži večSistemi za zaznavanje celične gostote v sintezni biologiji
Sistemi za zaznavanje celične gostote v sintezni biologiji Zaznavanje celične gostote (quorum sensing, QS) Celice med seboj komunicirajo preko signalnih molekul, ki v drugi celici sprožijo odziv na ravni
Prikaži večZdravljenje raka debelega črevesa in danke Pomen napovednih bioloških označevalcev RAS slovenija
Zdravljenje raka debelega črevesa in danke Pomen napovednih bioloških označevalcev RAS slovenija Izdalo: Združenje Europacolon Slovenija Strokovni pregled vsebine: doc. dr. Janja Ocvirk dr. med. Pozdravljeni,
Prikaži večMicrosoft Word - tehnicna_navodila_kmetija_popravek_kk.doc
Tehnina navodila za popis tipinih gospodarskih objektov, ki pripadajo kmetiji Popis nepreminin je namenjen pridobitvi dejanskih podatkov o stavbah in njenih delih. Podatki o stavbah se vodijo v javni evidenci
Prikaži večSlide 1
Slide 1 OBDELAVA ODPADNE VODE Slide 2 KAKO POVRNITI PORUŠENI EKOSITEM V PRVOTNO STANJE? KAKO POVRNITI PORUŠENI EKOSITEM V PRVOTNO STANJE?! uravnavanje ph, alkalnosti! odstranjevanje ali dodajanje elementov!
Prikaži večMED RAZGL 2000; 39: 3 21 RAZISKOVALNI ^LANEK Matev` Srp~i~ 1 Regeneracija po{kodovanega perifernega `ivca podgane brez celi~ne podpore distalno od mes
MED RAZGL 2000; 39: 3 21 RAZISKOVALNI ^LANEK Matev` Srp~i~ 1 Regeneracija po{kodovanega perifernega `ivca podgane brez celi~ne podpore distalno od mesta po{kodbe 2 Regeneration of Injured Peripheral Rat
Prikaži večDiapozitiv 1
ZAHTEVE TENIŠKE IGRE V tej predstavitvi bomo... Analizirali teniško igro z vidika fizioloških procesov Predstavili energijske procese, ki potekajo pri športni aktivnosti Kako nam poznavanje energijskih
Prikaži večTysabri, INN: natalizumab
25/04/2016 EMA/266665/2016 EMA potrjuje priporočila za zmanjševanje tveganja za možgansko okužbo PML pri Pri bolnikih s povečanim tveganjem je treba razmisliti o pogostejšem magnetnoresonačnem slikanju.
Prikaži večDruštvo za elektronske športe - spid.si Vaneča 69a 9201 Puconci Pravila tekmovanja na EPICENTER LAN 12 Hearthstone Na dogodku izvaja: Blaž Oršoš Datum
Pravila tekmovanja na EPICENTER LAN 12 Hearthstone Na dogodku izvaja: Blaž Oršoš Datum: 5. januar 2016 Društvo za elektronske športe [1/5] spid.si Slovenska pravila 1 OSNOVNE INFORMACIJE 1.1 Format tekmovanja
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - Prek-kakovost-zraka [Samo za branje]
Kakovost zraka v bivalnih prostorih doc. dr. Matjaž Prek, univ. dipl. inž. str. 25. januar 2018 ZAKON o graditvi objektov (ZGO-1) 9. člen (gradbeni predpisi) (1) Z gradbenimi predpisi se za posamezne vrste
Prikaži večPomen zgodnje vključitve bolnika na čakalni seznam za presaditev ledvice Miha Arnol Ljubljana, 28. marec 2019
Pomen zgodnje vključitve bolnika na čakalni seznam za presaditev ledvice Miha Arnol Ljubljana, 28. marec 2019 Presaditev ledvice je najboljši način nadomestnega zdravljenja KOL... ...za bolnike, ki so
Prikaži večWorkhealth II
SEMINAR Development of a European Work-Related Health Report and Establishment of Mechanisms for Dissemination and Co- Operation in the New Member States and Candidate Countries - WORKHEALTH II The European
Prikaži večovitek FIT-1
Funkcionalna inzulinska terapija Dnevnik vodenja FIT 1 Vaš diabetes v novi luči Sistem za merjenje glukoze v krvi 12:24 Moje vrednosti SRE TOR PET Danes, petek, 21. oktober 5.2 mmol L 12:23 Moj teden (Zadnjih
Prikaži večPAST CONTINUOUS Past continuous uporabljamo, ko želimo opisati dogodke, ki so se dogajali v preteklosti. Dogodki so se zaključili v preteklosti in nič
PAST CONTNUOUS Past continuous uporabljamo, ko želimo opisati dogodke, ki so se dogajali v preteklosti. Dogodki so se zaključili v preteklosti in nič več ne trajajo. Dogodki so v preteklosti trajali dalj
Prikaži večKnjiga 1 crna.qxd
Mednarodna klasifikacija funkcioniranja, zmanj{ane zmo`nosti, invalidnosti in zdravja SZO, @eneva IVZ RS in IRSR, Ljubljana Naslov: Mednarodna klasifikacija funkcioniranja, zmanj{ane zmo`nosti, invalidnosti
Prikaži večROSEE_projekt_Kolesarji
SEMINAR/DELAVNICA V OKVIRU PROJEKTA MOBILE2020 VARNOST KOLESARJEV IN KOLESARSKEGA PROMETA Ljubljana, 27. 3. 2013, Grand hotel Union ROSEE: Road safety in SouthEast Europe Predstavitev projekta mag.jure
Prikaži večvestnik 77_1.qxd
Geografski vestnik 77-1, 2005, 79 88 Razgledi RAZGLEDI SPREMINJANJE PODNEBJA TER ^LOVEKOVO ZDRAVJE IN PO^UTJE AVTORICA Naziv: mag., univerzitetna diplomirana meteorologinja Naslov: Oddelek za klimatologijo,
Prikaži večZSL Transfuzijska dejavnost
21. TRANSFUZIJSKA DEJAVNOST / BLOOD TRANSFUSION SERVICES 21-0 Uvod Introduction 21-1 Zdravniki, zaposleni v transfuzijski dejavnosti, 2012 Physicians in the blood transfusion services, 2012 21-2 Drugi
Prikaži večLayout 1
Zdru`enje zdravnikov dru`inske medicine Zavod za razvoj dru`inske medicine v sodelovanju s Katedro za dru`insko medicino 22. SCHROTTOVI DNEVI Ljubljana, 15. in 16. marec 2019 Cankarjev dom Linhartova dvorana
Prikaži večBrexit_Delakorda_UMAR
MAKROEKONOMSKI IZGLEDI ZA EU IN SLOVENIJO KAKŠNA JE / BO VLOGA BREXITA? Aleš Delakorda, UMAR C F A S l o v e n i j a, 1 7. 1 0. 2 0 1 6 M A K R O E K O N O M S K I P O L O Ž A J I N I Z G L E D I Z A E
Prikaži večCepljenje proti okužbam s HPV (predavanje za starše)
Cepljenje proti okužbam s humanimi papilomavirusi (HPV) predstavitev za starše Cepljenje in cepiva S cepljenjem izzovemo imunost tako, da s cepivom v telo vnesemo oslabljene ali uničene bakterije, viruse
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - cigre_c2_15.ppt [Compatibility Mode]
Univerza v Mariboru Fakulteta za elektrotehniko, računalništvo in informatiko Boštjan Polajžer, Drago Dolinar, Jožef Ritonja (FERI) bostjan.polajzer@um.si Andrej Semprimožnik (ELES) KAZALNIKI KAKOVOSTI
Prikaži večBilten 03.p65
BILTEN julij 2007, letnik 23, {tevilka 3 105 PRETOK IN UPORABA INFORMACIJ V REGISTRU RAKA NAJSTAREJ[EM ZDRAVSTVENEM REGISTRU V SLOVENIJI Tina @agar 1, Maja Primic @akelj 1, Vesna Zadnik 1 POVZETEK Register
Prikaži večMicrosoft Word - 10-Selekcijski intervju _4.del_.docx
številka 10,27.avg. 2004, ISSN 1581-6451, urednik:radovan Kragelj Pozdravljeni! V prejšnji številki mesečnika smo si ogledali, katera področja moramo vsebinsko obdelati v sklopu delovne zgodovine. V današnji
Prikaži večPOROČILO O VAJI: IZDIHAVANJE CO2 PRI ČLOVEKU
POROČILO O VAJI: FOTOSINTETSKA BARVILA V LISTIH RASTLIN Jan Vogler, 4.h, GIMB 1 UVOD Pri pouku biologije smo delali vajo z naslovom fotosintetska barvila v listih rastlin. Cilji vaje: dokazati da so v
Prikaži večKolokvij iz biokemije za biologe
Kolokvij BIOKEMIJA, 9.1. 2004 1.) Kako bi po obarjanju s 95% etanolom preverili če so v supernatantu še prisotni proteini? ( 4T ) 2.) Od česa je odvisna različna hitrost potovanja snovi pri tankoplastni
Prikaži večSrednja poklicna in strokovna šola Bežigrad - Ljubljana Ptujska ulica 6, 1000 Ljubljana STATISTIKA REGISTRIRANIH VOZIL V REPUBLIKI SLOVENIJI PROJEKTNA
Srednja poklicna in strokovna šola Bežigrad - Ljubljana Ptujska ulica 6, 1000 Ljubljana STATISTIKA REGISTRIRANIH VOZIL V REPUBLIKI SLOVENIJI PROJEKTNA NALOGA Mentor: Andrej Prašnikar (tehnično komuniciranje)
Prikaži večPraznovanja.qxd
MIRJAM GRILC PRAZNI^NE MIZE POGRINJKI IN JEDI ZALO@BA KME^KI GL AS MIRJAM GRILC PRAZNI^NE MIZE POGRINJKI IN JEDI ZALO@BA KME^KI GLAS VSEBINA ^E PRAZNIKE ZAPUSTI[, 5 PRAZNIKI ZAPUSTIJO TEBE KAKO PRIPRAVIMO
Prikaži večIzločanje arzenovih spojin pri pacientih zdravljenih z arzenovim trioksidom
Izločanje arzenovih spojin pri pacientih zdravljenih z arzenovim trioksidom Zdenka Šlejkovec, Helena Podgo Peter Černelč in Ingrid Falnog Akutna promielocitna levkemija (APL) Večina primerov APL (98%)
Prikaži večDELEGIRANA UREDBA KOMISIJE (EU) 2016/ z dne 2. junija o dopolnitvi Uredbe (EU) št. 600/ Evropskega parlamenta i
L 313/6 DELEGIRANA UREDBA KOMISIJE (EU) 2016/2021 z dne 2. junija 2016 o dopolnitvi Uredbe (EU) št. 600/2014 Evropskega parlamenta in Sveta o trgih finančnih instrumentov v zvezi z regulativnimi tehničnimi
Prikaži večDISTRIBUCIJA
PORAZDELITEV (DISTRIBUCIJA) ZDRAVILNIH UČINKOVIN V ORGANIZMU Univerza v Ljubljani Fakulteta za farmacijo dr. Igor Locatelli doc. dr. Mojca Kerec Kos Fakulteta za farmacijo, Univerza v Ljubljani (L)ADME
Prikaži več6.1 Uvod 6 Igra Chomp Marko Repše, Chomp je nepristranska igra dveh igralcev s popolno informacijo na dvo (ali vec) dimenzionalnem prostoru
6.1 Uvod 6 Igra Chomp Marko Repše, 30.03.2009 Chomp je nepristranska igra dveh igralcev s popolno informacijo na dvo (ali vec) dimenzionalnem prostoru in na končni ali neskončni čokoladi. Igralca si izmenjujeta
Prikaži večKomisija za študijske zadeve UL Medicinske fakultete Vrazov trg 2 SI-1000 Ljubljana E: T: Režim študija Predmet: Uvod
Komisija za študijske zadeve UL Medicinske fakultete Vrazov trg 2 SI-1000 Ljubljana E: ksz@mf.uni-lj.si T: +386 1 543 7700 Režim študija Predmet: Uvod v medicino, modul Informatika Študijski program: EMŠ
Prikaži večELEKTROKEMIJA 1. Izračunajte potencial inertne elektrode v raztopine, ki jo dobimo, če zmešamo 5,0 ml 0,1 M Ce 4+ in 5,0 ml 0,3 M raztopine Fe 2+! (E
ELEKTROKEMIJA 1. Izračunajte potencial inertne elektrode v raztopine, ki jo dobimo, če zmešamo 5,0 ml 0,1 M Ce 4+ in 5,0 ml 0,3 M raztopine Fe 2+! (E o Fe 2+ /Fe 3+ = 0,771 V) Rez.: 0,735 V 2. Izračunajte
Prikaži večUniverzitetni študijski program Fizika I
Medicinska fizika II. stopnja 1. Splošni podatki o študijskem programu Ime študija: Magistrski študijski program Medicinska fizika. Stopnja študija: Druga bolonjska stopnja. Vrsta študija: Enopredmetni
Prikaži večDISTRIBUCIJA
DISTRIBUCIJA ZDRAVILNIH UČINKOVIN V ORGANIZMU Univerza v Ljubljani Fakulteta za farmacijo doc. dr. Mojca Kerec Kos Fakulteta za farmacijo, Univerza v Ljubljani (L)ADME SISTEM MESTO DELOVANJA OSTALA TKIVA
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - FK3Anatgonist5HT2c.ppt [Samo za branje] [Združljivostni način]
Iskanje idealnega anksiolitika Iskanje = načrtovanje, sineza in vrednotenje Iskanje idealnega anksiolitika Kaj je idealni anksiolitik? Idealni anksiolitik: - ni sedativ, - per os uporabna učinkovina -
Prikaži večMED RAZGL 1998; 37: Vplivi zdravil na rezultate laboratorijskih preiskav Effects of drugs on clinical laboratory tests results Ale{ Jerin*, Fr
MED RAZGL 1998; 37: 563 569 Vplivi zdravil na rezultate laboratorijskih preiskav Effects of drugs on clinical laboratory tests results Ale{ Jerin*, Franc Kozjek** Klju~ne besede vplivi zdravil laboratorijske
Prikaži večMicrosoft PowerPoint vaja-salen
Sinteza mimetika encima SD 1. stopnja: H 2 salen 18/11/2010 Vaje iz Farmacevtske kemije 3 1 Sinteza N,N - bis(saliciliden)etilendiamina Predlagajte orositveni reagent za detekcijo poteka reakcije in za
Prikaži večInformacijska družba IS 2008 / Information Society IS mednarodna multi-konferenca / 11 th Intermational Multi-Conference Vzgoja in izobraževa
Informacijska družba IS 2008 / Information Society IS 2008 11. mednarodna multi-konferenca / 11 th Intermational Multi-Conference Vzgoja in izobraževanje v informacijski družbi / Education in Information
Prikaži večSvet Evropske unije Bruselj, 11. avgust 2017 (OR. en) Medinstitucionalna zadeva: 2017/0188 (NLE) 11653/17 FISC 173 PREDLOG Pošiljatelj: Datum prejema:
Svet Evropske unije Bruselj, 11. avgust 2017 (OR. en) Medinstitucionalna zadeva: 2017/0188 (NLE) 11653/17 FISC 173 PREDLOG Pošiljatelj: Datum prejema: 9. avgust 2017 Prejemnik: Št. dok. Kom.: Zadeva: za
Prikaži večkolofon
1 Uredni{ki odbor Jana [ubic Prislan, Irena Porekar Kacafura, Igor Ravbar, Nada Mad arac, Eva Ilec in Zoran Mili} Glavni in odgovorni urednik Zoran Mili} Tehni~ni urednik Zoran Mili}, Gorazd Lemaji~ Lektorica
Prikaži večAkcije jesen september-december Restorativa Preventiva Endodontija Kerr restorativa Odkrijte našo ponudbo najnovejših restorativnih materi
Akcije jesen 2018. september-december 2018. Restorativa Preventiva Endodontija Kerr restorativa Odkrijte našo ponudbo najnovejših restorativnih materialov. Kerr Endodontija Na zamudite aparata za strojno
Prikaži večMicrosoft Word - 13-Selekcijski intervju.docx
številka 13, 15. dec.2004, ISSN 1581-6451, urednik:radovan Kragelj Pozdravljeni! Danes nadaljujemo z vprašanji, s katerimi vrednotite konkretne lastnosti in sposobnosti posameznega kandidata. V prejšnjih
Prikaži več1. izbirni test za MMO 2018 Ljubljana, 16. december Naj bo n naravno število. Na mizi imamo n 2 okraskov n različnih barv in ni nujno, da imam
1. izbirni test za MMO 018 Ljubljana, 16. december 017 1. Naj bo n naravno število. Na mizi imamo n okraskov n različnih barv in ni nujno, da imamo enako število okraskov vsake barve. Dokaži, da se okraske
Prikaži večPowerPointova predstavitev
Seznam predoperativnih preiskav in testov za pripravo pacienta na poseg v osnovnem zdravstvu Zahtevnost posega MALI SREDNJE VELIKI VELIKI ASA razred ASA 1 ASA 2 ASA 3 ASA 4 ASA 1 ASA 2 ASA 3 ASA 4 ASA
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - CIGER - SK 3-15 Izkusnje nadzora distribucijskih transformatorjev s pomo... [Read-Only]
CIRED ŠK 3-15 IZKUŠNJE NADZORA DISTRIBUCIJSKIH TRANSFORMATORJEV S POMOČJO ŠTEVCEV ELEKTRIČNE ENERGIJE ŽIGA HRIBAR 1, BOŠTJAN FABJAN 2, TIM GRADNIK 3, BOŠTJAN PODHRAŠKI 4 1 Elektro novi sistemi. d.o.o.,
Prikaži večKmetijska šola Grm Sevno Novo mesto PROIZVODNJA IN UPORABA ENCIMOV Marec, 2007
Kmetijska šola Grm Sevno 13 8000 Novo mesto PROIZVODNJA IN UPORABA ENCIMOV Marec, 2007 O ENCIMIH So najpomembnejša skupina beljakovin, so biokatalizatorji, znanih je okoli 3000, znižujejo aktivacijsko
Prikaži večZAHTEVA ZA VZDRŽEVANJE LEI (sklad) REQUEST FOR A MAINTENANCE OF LEI (fund) 1. PODATKI O SKLADU / FUND DATA: LEI: Ime / Legal Name: Druga imena sklada
ZAHTEVA ZA VZDRŽEVANJE LEI (sklad) REQUEST FOR A MAINTENANCE OF LEI (fund) 1. PODATKI O SKLADU / FUND DATA: LEI: Ime / Legal Name: Druga imena sklada / Other Fund Names: Matična številka / Business Register
Prikaži večPRILOGA 1 Seznam standardov Direktiva Sveta z dne 20. junija 1990 o približevanju zakonodaje držav članic o aktivnih medicinskih pripomočkih za vsadit
PRILOGA 1 Seznam standardov Direktiva Sveta z dne 20. junija 1990 o približevanju zakonodaje držav članic o aktivnih medicinskih pripomočkih za vsaditev (UL L št. 189 z dne 20. 7. 1990, str. 17; v nadaljnjem
Prikaži večOkužba s HIV v Sloveniji Podatki o prijavljenih primerih do vključno 22. novembra
Okužba s HIV v Sloveniji Podatki o prijavljenih primerih do vključno 22. novembra 2017 1 Pregled vsebine Ključni poudarki 3 Priporočila 3 1 Nove diagnoze okužb s HIV 4 2 Pozne diagnoze 6 3 Aids in smrt
Prikaži večDES
Laboratorij za načrtovanje integriranih vezij Univerza v Ljubljani Fakulteta za elektrotehniko Digitalni Elektronski Sistemi Digitalni sistemi Vgrajeni digitalni sistemi Digitalni sistem: osebni računalnik
Prikaži večMicrosoft Word - P072-A doc
[ifra kandidata: Dr`avni izpitni center *P072A22112* JESENSKI ROK ANGLE[^INA Izpitna pola 2 Pisno sporo~anje A: Kraj{i pisni sestavek B: Vodeni spis ^etrtek, 30. avgust 2007 / 60 minut (20 + 40) Dovoljeno
Prikaži večOsnove statistike v fizični geografiji 2
Osnove statistike v geografiji - Metodologija geografskega raziskovanja - dr. Gregor Kovačič, doc. Bivariantna analiza Lastnosti so med sabo odvisne (vzročnoposledično povezane), kadar ena lastnost (spremenljivka
Prikaži večgeologija 265 do konca.indd
GEOLOGIJA 51/2, 270-274, Ljubljana 2008 doi:10.5474/geologija.2008.027 Ocenjevanje znanstveno raziskovalnega dela na podro~ju geologije v Sloveniji Mihael BREN^I^ Katedra za geologija krasa in hidrogeologijo,
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - 3_MACS+_Pozarni_testi_slo.ppt [Compatibility Mode]
Obnašanje jeklenih in sovprežnih stropnih konstrukcij v požaru Vsebina novih požarnih testov Izvedeni so bili požarni preizkusi v okviru projektov FRACOF (ISO požar) COSSFIRE (ISO požar) FICEB (Naravni
Prikaži večVHF1-VHF2
VHF BREZŽIČNI MIKROFONSKI KOMPLET VHF1: 1 CHANNEL VHF2: 2 CHANNELS NAVODILA ZA UPORABO SLO Hvala, ker ste izbrali naš BREZŽIČNI MIKROFONSKI KOMPLET IBIZA SOUND. Za vašo lastno varnost, preberite ta navodila
Prikaži večOtroci v mestu.brosura
OD MLADIH NOG, Z GIBANJEM DO ZDRAVJA! OD MLADIH NOG, Z GIBANJEM DO ZDRAVJA! Izdajatelj: Dru{tvo za zdravje srca in o`ilja Slovenije Dalmatinova 10, 1000 Ljubljana T.: 01/234 75 50, F.: 01/234 75 54 E.:
Prikaži večSlide 1
MODEL ODLIČNOSTI REFERENČNE AMBULANTE Darinka Klančar NAMEN PREDSTAVITVE European Practice Assessment EPA Evropski model poslovne odličnosti EFQM Samoocena ambulante/odličnost ambulante EPA European Practice
Prikaži več4. tema pri predmetu Računalniška orodja v fiziki Ljubljana, Grafi II Jure Senčar
4. tema pri predmetu Računalniška orodja v fiziki Ljubljana, 6.4.29 Grafi II Jure Senčar Relativna sila krčenja - F/Fmax [%]. Naloga Nalogo sem delal v Excelu. Ta ima vgrajeno funkcijo, ki nam vrne logaritemsko
Prikaži večNo Slide Title
Glavne napake-pomoč KRONOS 1 Diagnostika in dostop do sistema PEČICA NAPAKA NAPAKA PRIKAZANA Z KODO NAPAKE NAPAKA BREZ INDIKACIJE KODE NAPAKE 2 Diagnostika in dostop do sistema Prikaz kode napake Informacije
Prikaži večMicrosoft Word - P101-A doc
Š i f r a k a n d i d a t a : Državni izpitni center *P101A22112* SPOMLADANSKI IZPITNI ROK ANGLEŠČINA Izpitna pola 2 Pisno sporočanje A) Krajši pisni sestavek B) Vodeni spis Sobota, 29. maj 2010 / 60 minut
Prikaži večmmmm
Hemoglobin, Globinopatije, Rozman D., 20.4.2012 Najpomembnejši človeški Hb Vrsta Struktura podenot Razširjenost HbA (odrasli) α 2 β 2 90% Hb odraslih HbA 2 (odrasli) α 2 δ 2 2-5% Hb odraslih HbF (fetalni)
Prikaži večMicrosoft Word - A-3-Dezelak-SLO.doc
20. posvetovanje "KOMUNALNA ENERGETIKA / POWER ENGINEERING", Maribor, 2011 1 ANALIZA OBRATOVANJA HIDROELEKTRARNE S ŠKOLJČNIM DIAGRAMOM Klemen DEŽELAK POVZETEK V prispevku je predstavljena možnost izvedbe
Prikaži večMED RAZGL 1994; 33: Vpliv lipoproteina(a) na fibrinolizo in vitro The effect of lipoprotein(a) on fibrinolysis in vitro Jana Ambro`i~*, Bla` B
MED RAZGL 1994; 33: 145 159 Vpliv lipoproteina(a) na fibrinolizo in vitro The effect of lipoprotein(a) on fibrinolysis in vitro Jana Ambro`i~*, Bla` Berger** Deskriptorji fibrinoliza lipoproteini plazminogen
Prikaži večujma_ xp
POLETNA VRO^INA LETA 1998 Heat Load in the Summer of 1998 19 Tanja Cegnar* UDK 551.58 1998 Povzetek Po dveh zaporednih poletjih, ki sta minili brez izrazite vro~ine, je bilo poletje 1998 spet vro~e. Prvo
Prikaži večZbornik predavanj in referatov 11. Slovenskega posvetovanja o varstvu rastlin z mednarodno udeležbo Bled, marec 2013 VPLIV METODE OCENJEVANJA ST
VPLIV METODE OCENJEVANJA STOPNJE OKUŽBE PRI DOLOČANJU UČINKOVITOSTI FUNGICIDOV ZA ZATIRANJE OIDIJA VINSKE TRTE (Erysiphe necator) Stanislav VAJS 1, Mario LEŠNIK 2, Jože MIKLAVC 3, Boštjan MATKO 4, Miroslav
Prikaži večM-Tel
Poročilo o meritvah / Test report Št. / No. 16-159-M-Tel Datum / Date 16.03.2016 Zadeva / Subject Pooblastilo / Authorization Meritve visokofrekvenčnih elektromagnetnih sevanj (EMS) Ministrstvo za okolje
Prikaži večAKCIJSKI NAČRT VILJEM JULIJAN za izboljšanje stanja na področju redkih bolezni v Sloveniji Ob priložnosti svetovnega dneva redkih bolezni 28. februarj
AKCIJSKI NAČRT VILJEM JULIJAN za izboljšanje stanja na področju redkih bolezni v Sloveniji Ob priložnosti svetovnega dneva redkih bolezni 28. februarja 2019 v Skladu Viljem Julijan podajamo pobudo za izboljšanje
Prikaži večPowerPoint Presentation
IV. Mednarodna znanstvena konferenca: ZA ČLOVEKA GRE: DRUŽBA IN ZNANOST V CELOSTNI SKRBI ZA ČLOVEKA Alma Mater Europaea - ECM Maribor, 11-12. marec 2016 ODZIVANJE ZDRAVSTVENEGA OSEBJA V PRIMERIH NASILJA
Prikaži večPoročanje o domnevnih neželenih učinkih zdravil za uporabo v humani medicini v letu Številka: /2014 Datum: Poročanje o domnevn
1 Številka: 1382-18/2014 Datum: 31.7.2014 Poročanje o domnevnih neželenih učinkih zdravil za uporabo v humani medicini v letu 2013 V poročilu želimo na kratko predstaviti poročanje o domnevnih neželenih
Prikaži večMicrosoft Word - MD_1_IJS_Mrovlje.doc
Aplikacija za merjenje razdalj s pomojo stereoskopskih posnetkov Jernej Mrovlje 1, amir Vrani 1 Institut»Jožef Stefan«1 Jamova cesta 39, 1 Ljubljana, Slovenija jernej.mrovlje@ijs.si, damir.vrancic@ijs.si
Prikaži večIZVEDBENI SKLEP KOMISIJE - z dne marca o določitvi meril za ustanavljanje in vrednotenje evropskih referenčnih mrež in
17.5.2014 L 147/79 IZVEDBENI SKLEP KOMISIJE z dne 10. marca 2014 o določitvi meril za ustanavljanje in vrednotenje evropskih referenčnih mrež in njihovih članov ter za lažjo izmenjavo informacij in strokovnega
Prikaži večPowerPointova predstavitev
Pripravil: Miha Miha Šetina Šetina >> Zrakotesno, energetsko varčno in tajnostno vgrajevanje, zunanjega stavbnega pohištva po evropskih smernicah EnEV oz RAL z inovativnimi sistemi Pinta abdichtung >>
Prikaži večMicrosoft PowerPoint - IPBI-V Sistematično iskanje informacij in vrednotenje virov_final-objava
Katedra za socialno farmacijo Fakulteta za farmacijo Univerza v Ljubljani Izbrana poglavja iz biomedicinske informatike Sistematično iskanje informacij in vrednotenje virov Poiščite informacijo o specifičnosti
Prikaži večVerjetnost in vzorčenje: teoretske porazdelitve standardne napake ocenjevanje parametrov as. dr. Nino RODE prof. dr. Blaž MESEC
Verjetnost in vzorčenje: teoretske porazdelitve standardne napake ocenjevanje parametrov as. dr. Nino RODE prof. dr. Blaž MESEC VERJETNOST osnovni pojmi Poskus: dejanje pri katerem je izid negotov met
Prikaži večasist. Dr. Urška Bukovnik Program: Terapije Hotel PLESNIK 4-DNEVNI TERAPEVTSKI PROGRAM Lokacija: butični Hotel Plesnik KRATEK OPIS: Terapevtski progra
4-DNEVNI TERAPEVTSKI PROGRAM Lokacija: butični Hotel Plesnik KRATEK OPIS: Terapevtski program je osnovan na individualni obravnavi posameznika in namenjen vsem ki se spopadajo z izgorelostjo, vsem ki bi
Prikaži več