Pripravki granulocitov iz polne krvi (buffy coat) - KLZ Podčetrtek, 8. 1 0. 2 0 16 AV TO R I C A : A n d r e j a H r a š o v e c - L a m p r e t, d r. m e d., s p e c. t r a n s f. m e d. S O AV TO R : m a g. M a r ko c u k j a t i, d r. m e d., s p e c. t r a n s f. m e d.
Pripravki granulocitov KLF: granulociti, pridobljeni s postopkom afereze (stimulirani darovalci) KLZ: granulociti, pridobljeni iz polne krvi, zlitje (nestimulirani, naključni darovalci krvi)
Primerjava KLF in KLZ Prednosti: Razpoložljivost darovalcev Darovalci niso izpostavljeni stimulaciji in drugim agensom (HES, G-CSF, KS, citrat,..) Enostavnejša organizacija Slabosti: manjše št. nevtrofilcev v pripravku (1x10 10 ) Policitemija pri pediatričnih pacientih Možni zapleti Aloimunizacija (HLA,HPA,eritrocitna protitelesa) TTID
Značilnosti komponente KLZ Alternativa KLF (nujnost, težko zagotoviti darovalce,..) Zlitje LTP večih krvodajalcev (10) Vsebnost pripravka: Abs. št. nevtrofilcev: >0,5 x 10 10 ; priporočljiv odmerek:1-2 enoti KLZ /dan Vsebuje cca 2 terapevtski dozi trombocitov (transfuzija trombocitov?) Večji volumen eritrocitov (30-60mL): navzkrižni preizkus! Hranjenje KLZ: sobna temperatura 20-24 C Izdaja: čimprej, najkasneje do polnoči dneva 1 nujno OBSEVANJE pred izdajo
Granulocyte therapy, Februar 2014:
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje - KLZ Metode: Priprava 16 enot KLZ 1 enota KLZ: zlitje 10 naključnih enot LTP AB0, RhD in K-skladne Prilagoditev programa za avtomatsko ločevanje (Compomat G5- program granulociti BC) Vzorčenje: 1. po zlitju 10 BC, pred centrifugiranjem: hemogram 2. 120 minut po pripravi končne komponente: hemogram, agregati,ph 3. naslednji dan zjutraj (48 ur po odvzemu): hemogram, agregati, ph, viabilnost Kriteriji sprejemljivosti: volumen 250mL 300mL nevtrofilci > 0,5x10 10 /E hematokrit < 0,25 mikrobiološka kontrola: negativna
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje KLZ 10 darovalcev polne krvi DAN 0 10 buffy coat-ov AB0, RhD in K-skladnih Zlitje 10BC DAN 1 Centrifugiranje Ločevanje Dodamo 200ml plazme PMN supernatant precipitat KONČNI PRIPRAVEK GRANULOCITOV -KLZ
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje KLZ Rezultati Kriteriji sprejemljivosti 250-300ml < 0,25 > 0,5x 10 10 KLZ Volumen (ml) Hematokrit Absolutno število nevtrofilcev po 48.urah Viabilnost (%) Absolutno št. Trombocitov (10 9 ) KLZ 1 311 0,207 0,519906 92,6 755,8868 KLZ 2 283 0,224 0,628302 93,2 711,2264 KLZ 3 294 0,206 0,63283 89,3 652,5509 KLZ 4 283 0,209 0,503774 85,7 679,5283 KLZ 5 312 0,208 0,649509 86,8 736,3189 KLZ 6 296 0,212 0,796849 85,5 816,1038 KLZ 7 288 0,218 0,767887 88,7 742,7717 KLZ 8 290 0,176 0,440226 88,7 689,3019 KLZ 9 281 0,203 0,593189 84,7 710,1396 KLZ 10 286 0,225 0,217531 84,4 619,7208 KLZ 11 311 0,212 0,435849 87,8 747,7925 KLZ 12 269 0,209 0,693679 91,3 587,2075 KLZ 13 275 0,207 0,458462 93,3 614,6689 KLZ 14 275 0,197 0,269962 85,8 753,6906 KLZ 15 278 0,197 0,336745 91,4 741,9528 KLZ 16 281 0,208 0,596 91,5 766,6472 Povprečje 288 0,207 0,533794 88,8 708,0023 Mikrobiološka kontrola: negativna
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje KLZ Rezultati
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje KLZ Rezultati
Priprava granulocitov, pridobljenih iz polne krvi, zlitje KLZ Rezultati
Povzetek rezultatov (kriteriji sprejemljivosti) Volumen KLZ ustreza kriterijem sprejemljivosti v 81% Št. nevtrofilcev je bilo ustrezno pri 63% KLZ Vrednosti Ht so bile ustrezne v 100%
KLZ pripravljeni na ZTM 284 (269-312) / 20,8 (17,6-22,5) 0,57 (0,48-0,63) 5,6 (2,2-8) / 724 (578-816) Bashir S, Stanworth S, Massey E et al. Neutrophil function is preserved in a pooled granulocyte component prepared from whole blood donations. BJH, 2008; 140;701-11
Povzetek rezultatov (ostali parametri) Viabilnost celic po 48 urah 88,8% (Bashir 99 93% ) Padec absolutnega št. nevtrofilcev v povprečju za 0,03x10 10 /enoto Št. trombocitov (2-3 terapevtski odmerki) Padec ph po 48.urah (Bashir 6,6) (uporaba ohranitvene raztopine za trombocite) 7 6,9 6,8 6,7 6,6 6,5 6,4 6,3 6,2 6,1 6 ph po 120.min ph po 48.urah
Zaključek novi izzivi Priprava granulocitnih pripravkov po opisanem postopku ne daje zadovoljivih rezultatov, zato so potrebne dodatne izboljšave *Drug način priprave KLZ (5BC + 5 BC) *Dodatek ohranitvene raztopine za trombocite namesto plazme CILJ: 1. Zmanjšati volumen pripravka 2. Zmanjšati št. eritrocitov v pripravku 3. Zagotoviti stabilne rezultate glede abs. št. nevtrofilcev v pripravku 4. V prihodnosti zagotoviti novo krvno komponento KLZ, ki bo varna in kakovostna
Hvala za pozornost!